发明名称 |
仔猪水肿病大肠杆菌基因突变株及其构建方法 |
摘要 |
本发明提供仔猪水肿病大肠杆菌基因突变株及其构建方法。设计扩增编码类志贺氏毒素II型变异体基因及其左侧翼序列的特异性引物;通过PCR扩增获得编码类志贺氏毒素II型变异体基因及其左侧翼序列,分别进行克隆、测序鉴定;设计两对针对基因进行定点突变的突变引物;PCR扩增两个突变片断,分别克隆、测序鉴定;利用二重PCR将两个突变片断连接起来,并克隆、测序鉴定;将突变的基因亚克隆至自杀质粒pCVD442中;诱导致水肿病的0139大肠杆菌的萘啶酮酸抗性;利用突变菌株无Amp及蔗糖抗性,而具有萘啶酮酸抗性,并且其基因PCR产物可特异性的被Stu I核酸内切酶切开成功筛选出完成同源重组的0139大肠杆菌突变株。可以为仔猪水肿病的常规预防提供一种较好的疫苗后备菌株。 |
申请公布号 |
CN1995331A |
申请公布日期 |
2007.07.11 |
申请号 |
CN200610151213.X |
申请日期 |
2006.12.29 |
申请人 |
东北农业大学 |
发明人 |
师东方;付海兵 |
分类号 |
C12N1/21(2006.01);C12N15/31(2006.01);C07K14/265(2006.01);A61K39/108(2006.01) |
主分类号 |
C12N1/21(2006.01) |
代理机构 |
哈尔滨市哈科专利事务所有限责任公司 |
代理人 |
祖玉清 |
主权项 |
1、一种仔猪水肿病大肠杆菌基因突变株,其特征是:突变后的SLT-IIe*基因特征为:完整的SLT-IIe*基因有两个开放阅读框,共1236个碱基,编码410个氨基酸残基,与野生的仔猪水肿病大肠杆菌0139编码类志贺氏毒素II型变异体的SLT-IIe仅有3个碱基的变异,共有2个氨基酸残基的变异。 |
地址 |
150030黑龙江省哈尔滨市香坊区木材街59号东北农业大学 |