ENSAYOS PCR DE HP MULTIPLEX FLUORESCENTE QUE USAN FLUOFOROS MULTIPLES.

摘要

Un procedimiento para detectar la presencia de un subtipo de papilomavirus humano (HPV) en una muestra que contiene ácido nucleico que comprende: (a) amplificar el ácido nucleico en presencia de una polimerasa de ácido nucleico y tres series de oligonucleótidos; en el que cada serie de oligonucleótidos está constituida por (i) un cebador directo discriminatorio de PCR que hibrida con una primera región de un subtipo de HPV, (ii) un cebador inverso discriminatorio de PCR que hibrida una segunda región del subtipo de HPV secuencia abajo de la primera región, (iii) una sonda fluorescente marcada con una molécula extintor y un fluoróforo que emite energía a una única emisión máxima; dicha sonda hibridando una región del subtipo de HPV entre la primera y la segunda región; en el que cada serie de oligonucleótidos hibrida específicamente con un amplicón diferente de HPV derivado del mismo subtipo de HPV; (b) permitir a dicha polimerasa de ácido nucleico digerir cada sonda fluorescente durante laamplificación para disociar dicho fluoróforo de dicha molécula extintor; (c) detectar un cambio de fluorescencia tras la disociación del fluoróforo y la molécula extintor, correspondiendo el cambio de fluorescencia a la existencia de amplificación del ácido nucleico; y (d) determinar que la muestra es positiva para el subtipo de HPV si se detecta un cambio de fluorescencia en al menos dos emisiones máximas.