氯霉素亲和柱及其制备方法和用途

摘要

本发明涉及一种氯霉素亲和柱及其制备方法和用途，其采用蛋白A琼脂糖凝胶(protein A-Sepharose 4 fast flow)作为固相载体，载体上的蛋白A与氯霉素抗体相偶联，偶联后的氯霉素抗体又与固定相化学键合，该亲和柱制备方法简单，可重复使用的，提高了富集和净化的效率，从而提高了方法的灵敏度，理论上可以适用多种基质，由于使用了蛋白A，所以只有IgG可以联结，偶联的特意性高，柱子的氯霉素负载量大，即使使用纯溶剂也可以多次重复使用。

主权项

1.一种氯霉素亲和柱的制备方法，其特征在于：(1)将氯霉素多克隆免疫血清抗体经过硫酸铵分级沉淀纯化后和0.01mol/L，pH7.4的磷酸盐缓冲液混合；(2)将蛋白A琼脂糖凝胶与0.01mol/L，pH7.4的磷酸盐缓冲液混合；(3)将(1)与(2)混合，室温，振荡1-3小时，蛋白A琼脂糖凝胶∶氯霉素多克隆免疫血清抗体∶0.01mol/L，pH7.4的磷酸盐缓冲液按体积1∶1∶3配比；(4)待氯霉素多克隆免疫血清抗体与蛋白A琼脂糖凝胶特异性结合后，分别用0.01mol/L，pH7.4的磷酸盐缓冲液和0.2mol/L，pH8.2的三乙醇胺溶液洗去未结合的抗体和杂蛋白；(5)然后加入0.2mol/L，pH8.2的三乙醇胺溶液和二甲基庚二酸酯，室温，振荡1-2小时，三乙醇胺溶液∶氯霉素多克隆免疫血清抗体∶蛋白A琼脂糖凝胶按体积1∶1∶1配比，三乙醇胺溶液∶二甲基庚二酸酯按1ml∶5mg配比；(6)用0.02mol/L，pH7.4的乙醇胺溶液终止联接反应后，换含0.01％柳硫汞钠的0.01mol/L，pH7.4，磷酸盐缓冲液置换柱内液体，装柱，0.25ml/柱，4℃保存。