冬虫夏草菌的一种仿生学培养方法

摘要

本发明涉及冬虫夏草菌丝体的一种仿生学培养方法。培养过程包括，单孢子分离及纯培养，液体培养基的配置，菌丝体纯培养菌种的接种，浅层液体静置培养，六个月后收获菌丝体。培养过程中每一个月用机械的方法将菌丝体打碎成单细胞或多细胞菌丝段。本发明的单孢子分离方法得到的纯培养，证明是冬虫夏草菌唯一的无菌型--被毛孢。本发明的培养方法，不需要发酵罐、摇床等昂贵设备的投入，极大的降低了成本。与深层液体发酵培养相比，1g干菌丝体的生产成本降低50％以上。

主权项

1.一种冬虫夏草菌的仿生学培养方法，其特征在于，以所述菌的菌丝段细胞或组织进行液体静置培养，培养过程包括以下步骤：培养基配置，菌丝段的接种，菌丝段的收获，培养过程中温度为10-20℃，压力为常压，光强为室内自然光，所述的菌丝段细胞或组织是由无菌的单个子囊孢子萌发所形成的，其中单孢子分离步骤为：(一)采集虫草菌种采挖子实体粗壮饱满、可妊部发育明显的冬虫夏草完整菌虫复合体，放入13-16℃培养箱中养护，保持合适的湿度，(二)子囊孢子的收集和萌发清除子实体表面杂质，用无菌蒸馏水冲洗，用75％的酒精进行表面消毒，置13-16℃培养箱内培养，待子囊开始弹射子囊孢子时，将开始弹射孢子的子实体伸入灭菌的生理盐水中，充分洗脱子囊孢子，将洗脱的子囊孢子放在13-16℃培养箱中3-5天，以便萌发，(三)接种针的制备用磨刀石将最小号缝衣针针尖磨钝，再将头部两边尽量磨薄，形成小铲状，然后套入普通接种棒中固定，(四)单孢子分离和纯培养在无菌操作下，将含有子囊孢子的液体摇匀，倒少量于灭菌的分离培养基平板中，静置5-10min，待水被吸入琼脂后，在低倍显微镜下用(三)制备的接种针挑取单个发芽的子囊孢子，接入灭菌的分离培养基平板中，每个平板均匀接入6-8个，将接种部位作好标记，放入13-16℃培养箱中培养2-4天，用消毒手术刀挖取未污染的带有子囊孢子的培养基放入新的分离培养基平板中，每平板一株，用胶带封口防止水分散失，放入13-16℃培养箱中培养，45-55天形成肉眼可见的菌落，其中所述液体静置培养是指液体深度为1-5cm的浅层液体静置培养，所述的菌丝段细胞或组织每培养一段时间在无菌条件下用机械的方法捣碎一次，所述的一段时间是指一个月，所述菌丝段细胞或组织机械捣碎的程度是单细胞或多细胞菌丝段，培养六个月后收获。