一种蛋白质凝胶内酶解的方法

摘要

本发明公开了一种蛋白质凝胶内酶解的方法。该方法包括下述步骤：1)将含有目标蛋白的凝胶用超纯水洗涤；将凝胶脱水，干燥；2)将干燥后的凝胶用酸化过的胰蛋白酶工作液浸泡0.5－1.5h后，吸去多余酶工作液；所述酸化过的胰蛋白酶工作液是用80－120mM盐酸溶解胰蛋白酶，酸化8－12分钟，再用NH₄HCO₃将pH值调节至8.0－9.0得到的溶液；3)加入含有Ca²⁺的缓冲液，37℃酶解14－18h，去除凝胶得到蛋白酶解液。本发明的方法在降低操作难度、简化实验步骤、降低成本的同时，能够有效提高了酶解效率，获得更多肽段信息，得到更高的数据库搜索分值，显著提高序列覆盖率，最终取得了更好的质谱鉴定结果。

主权项

1、一种蛋白质凝胶内酶解的方法，包括下述步骤：1)将含有目标蛋白的凝胶用超纯水洗涤；将凝胶脱水，干燥；2)将干燥后的凝胶用酸化过的胰蛋白酶工作液浸泡0.5-1.5h后，吸去多余酶工作液；所述酸化过的胰蛋白酶工作液是用80-120mM盐酸溶解胰蛋白酶，酸化8-12分钟，再用NH4HCO3将pH值调节至8.0-9.0得到的溶液；3)加入含有Ca2+的缓冲液，37℃酶解14-18h，去除凝胶得到蛋白酶解液。