一步法制备天花粉蛋白

摘要

本发明涉及生物化学领域，特别是涉及到一步法制备天花粉蛋白的技术。一步法制备天花粉蛋白技术是将天花粉原生材料去皮洗净，切碎，加醋酸缓冲液，匀浆，加50％冰醋酸调pH4.0，离心，上清液加样到醋酸缓冲液平衡的强阳离子交换树脂(S－Sepharose Fast Flow或SP－Sepharose Fast Flow)的柱上，用醋酸缓冲液洗至基线，再用磷酸缓冲液洗至基线，然后进行梯度洗脱，收集第1峰，就是纯化的天花粉蛋白。本技术不经过丙酮分级沉淀或硫酸铵沉淀及其后透析等步骤，在缓冲液抽提后，只经过一次强阳离子交换柱梯度洗脱，就可以制备到高纯度的天花粉蛋白。

主权项

1、一步法制备天花粉蛋白，其特征在于：该技术是将天花粉原生材料去皮洗净，切碎，加5mM，pH4.5醋酸缓冲液，匀浆，加50％冰醋酸调pH4.0，然后在4℃条件下，16000×g离心30min，上清液加样到20mM，pH4.5醋酸缓冲液平衡的强阳离子交换树脂S-Sepharose Fast Flow或SP-Sepharose FastFlow的柱上，280nm实时检测，用20mM，pH4.5醋酸缓冲液洗至基线，再用20mM，pH6.5磷酸缓冲液洗至基线，然后在20mM，pH6.5磷酸缓冲液中用0-0.6M NaCl进行梯度洗脱，收集第1峰，它就是纯化的天花粉蛋白。