细胞因子IL－24真核表达载体的构建及应用

摘要

本发明公开了一种细胞因子IL-24真核表达载体的构建及应用，其步骤是：首先是目的基因的扩增与纯化，设计上引物和下引物，以质粒TRAPIL-24为模板，采用人IL-24N端编码的第2个氨基酸开始进行PCR扩增，将目的条带切下后，用试剂盒回收纯化；其次是重组质粒pEGFP-C1-IL-24构建与鉴定，将纯化的PCR产物和载体pEGFP-C1用Bgl II和Sal I双酶切后，分别用试剂盒回收纯化酶切产物，连接片段，筛选培养，克隆，鉴定，测序。本发明包括证实重组细胞因子IL-24在治疗肝癌、小肠癌、黑色素瘤中的应用。本发明方法简便，操作方便，能抑制、预防和治疗肿瘤的生长。

主权项

1、一种细胞因子IL-24真核表达载体的构建方法，它包括下列步骤：A、目的基因的扩增与纯化，根据人IL-24 GeneBank序列设计引物，上游引物：5’GCAGATCTAATTTTCAACAGAGGCTG-3’，含有BglII酶切位点；下游引物：5’CGGTCGACTCAGAGCTTGTAGAATTTCTG-3’，含有Sal I酶切位点，以插入人IL-24完整编码区基因的质粒TRAPIL-24为模板，采用上述引物从人IL-24 N端编码的第2个氨基酸开始进行PCR扩增，扩增的反应条件为：95℃预变性2分钟，以95℃变性36秒，56℃退火36秒，72℃延伸1分钟24秒，扩增25个循环，再以72℃延伸5分钟，PCR扩增产物经12g/L琼脂糖凝胶电泳，将目的条带切下后，用试剂盒回收纯化；B、重组质粒pEGFP-C1-IL-24构建与鉴定，将纯化的PCR产物和载体pEGFP-C1用BglII和SalI双酶切后，分别用试剂盒回收纯化酶切产物，在T4DNA连接酶作用下定向连接IL-24片段至pEGFP-C1，将连接产物转化入DH5a感受态细菌中，在LB培养基中筛选培养，挑取阳性克隆，培养后提取质粒，采用BglII和SalI双位点单、双酶切鉴定，测序。