改进的碱裂解法提取基本纯质粒的方法

摘要

提供一种用碱裂解法提取基本纯质粒的方法，包括用碱性裂解液裂解工程菌、用中和液中和并使杂质凝聚及将含质粒的澄清液经离子交换层析柱或交换膜纯化，其中裂解步骤中直接采用能表达牛胰腺RNA酶的重组工程菌匀浆液；杂质凝聚步骤中先加入pH4.8-5.5的3M醋酸钾水溶液中和裂解液并凝聚杂质，在即将进行离子交换层析前加入混合有机酸液调节澄清液至酸性；纯化步骤中采用多层层析装置进行快速离子交换层析。本发明还提供这种多层层析装置。本发明的方法和装置简化了后续纯化步骤、节约了采用纯化牛胰腺RNA酶的成本及避免了传播疯牛病的危险，可快速有效并大量制备质粒。

主权项

1.一种改进的碱裂解法提取基本纯质粒的方法，包括用碱性裂解液裂解工程菌的裂解步骤、用中和液中和并使杂质凝聚的杂质凝聚步骤，和将含质粒的澄清液经含有高盐吸附低盐解离类填料的离子交换层析柱或交换膜纯化的纯化步骤，其特征在于：(1)裂解步骤中直接采用表达牛胰腺RNA酶的重组大肠杆菌的匀浆液来去除RNA杂质；(2)杂质凝聚步骤中先加入pH4.8-5.5的3M醋酸钾水溶液中和裂解液并凝聚杂质，在即将进行离子交换层析前加入混合有机酸液调节澄清液至pH3.0-3.5；(3)纯化步骤中采用笼格式常压多层层析装置进行快速离子交换层析，所述层析选用含有高盐吸附低盐解离类填料，所述装置通过中间隔板和衬垫膜将层析用填料分为多层。