家蚕重组杆状病毒感染的方法

摘要

本发明公开了一种家蚕重组杆状病毒感染的方法。利用应用脂质体介导技术经皮接种家蚕，达到了直接用病毒感染同样的感染效果。这种新的感染方法其优点在于改变了传统直接使用病毒的接种方式，避免了病毒可能扩散后引起作业环境污染的潜在危险性，提高了昆虫杆状病毒表达系统生物安全性。

主权项

1、一种家蚕重组杆状病毒感染的方法，其特征在于：(1)病毒基因组DNA的提取制备：用重组家蚕杆状病毒HyNPV-bFGF感染昆虫培养细胞Sf21，96h后低速离心收集细胞，加入PBS缓冲液悬浮后再离心1次；用STRATAGENE公司DNA Extraction Kit抽提病毒基因组，对RNA消化后用A260/280测定病毒基因组DNA纯度和浓度；(2)DNA与脂质体的混合：根据一定的浓度混合比例，脂质体的浓度确定在0.1g/L，病毒DNA浓度5ng/L，使用前室温放置30分钟；(3)重组病毒经皮感染：经皮穿刺接种用注射的方式，事先将五龄家蚕幼虫放置冰上10分钟，然后将含有病毒液或其DNA的混合液的针头平行插入昆虫家蚕腹部节间膜处，轻推针筒注射，注意不伤内部器官，每头家蚕注射量为20L；接种后30分钟给予桑叶饲养；(4)感染效果测定：72小时后取家蚕少量血液置于载玻片上，在显微镜下观察是否有病毒粒子，如果有说明已感染；并于96小时后观察发病症状。