短的双链RNAs的体外合成方法

摘要

本发明涉及合成短的双链RNAs的领域。披露了利用噬菌体聚合酶和用靶序列特异性单链DNA寡核苷酸作模板的体外转录方法。本发明特别适用于合成短的干扰RNAs(siRNAs)，业已证实这种干扰RNAs是在植物中的转录后基因沉默期间引起序列特异性RNA降解，以及无脊椎动物和脊椎动物系统的RNA干扰中的关键中间体。

主权项

1.一种用于合成长度少于30个核苷酸的靶特异性短的双链RNAs的方法，包括以下步骤：a)在一种反应混合物中混合靶特异性有义寡核苷酸模板和T7RNA聚合酶，以便形成模板延伸的有义寡核糖核苷酸产物；b)在一种反应混合物中混合靶特异性反义寡核苷酸模板和T7RNA聚合酶，以便形成模板延伸的反义寡核糖核苷酸产物；和c)让在步骤a)中获得的有义寡核糖核苷酸产物与在步骤b)中获得的互补性反义寡核糖核苷酸产物杂交，其特征在于：步骤a)和b)的寡核苷酸模板包括由图1所示的截短的T7 RNA聚合酶启动子序列组成的RNA聚合酶启动子序列，在所述模板链的5’末端用靶特异性模板序列延伸，其中，所述靶特异性模板序列包括位于5’末端的两个鸟苷，和位于3’末端的两个胞苷。