莫拉氏菌属(MORAXELLA)运铁蛋白之受体蛋白

摘要

莫拉氏菌属菌株，尤其是粘膜炎莫拉氏菌的经分离和纯化的未变性运铁蛋白之受体蛋白，经SDS-PAGE测定其表观分子量约为80-90kDa。运铁蛋白之受体蛋白或其片断类似物可用于诊断应用和免疫原性组合物中，尤其是可体内施用于宿主以保护宿主抵抗由莫拉氏菌属引起的疾病。

主权项

1.制备莫拉氏菌属菌株的经分离和纯化的未变性运铁蛋白之受体蛋白的方法，所述莫拉氏菌属菌株能够表达运铁蛋白受体蛋白，所述蛋白特征在于其经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳测定，表观分子量为80-90kDa，且不含莫拉氏菌属菌株的OMP B2蛋白和莫拉氏属菌菌株的表观分子量为105kDa的运铁蛋白之受体蛋白，并且结合人运铁蛋白；所述方法包括下述步骤：(a)提供粘膜炎莫拉氏菌菌株的细胞团块，所述菌株在缺乏铁的条件下生长以刺激运铁蛋白受体蛋白的表达；(b)从所述细胞团块中选择性提取水溶性蛋白质，即通过使包含10mM-1M Tris-HCl的pH为7-8.5的含水缓冲介质接触细胞团块，超声处理细胞团块使之破碎，再进行离心，从而提供第一上清液和第一沉淀物；(c)分离第一沉淀物和第一上清液；(d)从第一沉淀物中选择性溶解至少一种分子量为80-90kDa的运铁蛋白之受体蛋白，即通过使包含10mM-1M Tris-HCl、0.2-2wt％的Triton X-100和2-20mM的EDTA的pH为7-8.5的含水缓冲介质接触第一沉淀物至少一次，超声处理第一沉淀物使之破碎，再进行离心，从而提供第二上清液和第二沉淀物；(e)分离第二沉淀物和第二上清液；且(f)通过多次层析操作从第二上清液中纯化分子量为80-90kDa的运铁蛋白之受体蛋白，其中不含在选择性溶解步骤中从第一沉淀物中溶解的其它莫拉氏菌属蛋白质，所述操作包括：i)在含有用含10mM-1M Tris-HCl的pH为7-8.5的含水缓冲介质平衡的DEAE-Sephacel的第一层析柱上进行第一次层析操作，当该柱用所述缓冲液洗涤时，可使运铁蛋白之受体蛋白选择性地流出，而污染蛋白结合于柱上，ii)在含有用含10mM-1M Tris-HCl的pH为7-8.5的含水缓冲介质平衡的SE-纤维素或S-Sepharose的第二层析柱上进行第二次层析操作，当该柱用所述缓冲液洗涤时，可使运铁蛋白之受体蛋白选择性地流出，而污染蛋白结合于柱上，iii)在含有用含5-50mM KH2PO4的pH为6-8.5的含水缓冲介质平衡的羟基磷灰石的第三层析柱上进行第三次层析操作，当该柱用所述缓冲液洗涤时，可使运铁蛋白之受体蛋白选择性地结合于柱上，而粘膜炎莫拉氏菌菌株OMP B2蛋白和其它污染蛋白流出，和iv)用含150-250mM KH2PO4的pH为7-8.5的含水缓冲介质从第三层析柱上洗脱所述运铁蛋白之受体蛋白。