肺炎链球菌6B型、18C型、19F型、23F型多糖结合物中游离多糖含量的测定方法

摘要

本发明肺炎链球菌6B型、18C型、19F型、23F型多糖结合物中游离多糖含量的测定方法，属于生物技术领域，其步骤为取肺炎链球菌多糖结合物为样1，另取等量肺炎链球菌多糖结合物，加入无水乙醇和氯化钠，置－20℃70～90h，离心收集上清液为样2；用适当溶剂充分洗涤沉淀，离心收集上清液，为样3；通过测定样1、样2、样3的磷含量，按公式计算肺炎链球菌多糖结合物中的游离多糖含量。本发明能准确、简便地测定出肺炎链球菌6B型、18C型、19F型、23F型多糖结合物中游离多糖的含量，从而评价制品质量。

主权项

1、肺炎链球菌6B型、18C型、19F型、23F型多糖结合物中游离多糖含量的测定方法，其步骤是：(1)取所检肺炎链球菌多糖结合物3ml为样1；取所检肺炎链球菌多糖结合物对应衍生物溶液3ml为样4；(2)另取3ml所检肺炎链球菌多糖结合物置于50ml离心管；取3ml所检肺炎链球菌多糖结合物对应衍生物溶液置于另一50ml离心管；向每离心管中加入5mol/L氯化钠0.75毫升，振荡混匀，再加入无水乙醇15ml，振荡混匀，置于-20℃静置70-90小时；于5℃、4500～6500rpm离心60～90分钟，每离心管单独收集上清液，结合物上清液为样2，对应衍生物上清液为样5；(3)于上述每离心管中加入0.5ml 0～60％乙醇溶液，振荡混合，室温静置1小时，再加入1.5ml相同乙醇溶液，振荡混合，室温静置2小时，于15℃、4500～6500rpm离心40～60分钟，每离心管单独收集上清液，结合物上清液为样3，对应衍生物上清液为样6；(4)以生理盐水作对照，用磷测定法测定样1、样2、样3、样4、样5、样6的磷含量，分别为p1、p2、p3、p4、p5、p6；(5)根据公式计算回收率P：$P=\frac{p5+p6}{p4}\times 100\%$ ，回收率应为80-120％；(6)根据公式计算游离多糖含量H：$H=\frac{p2+p3}{p1}÷P\times 100\%$ ，式中P为回收率。