银杏内生真菌代谢产物在防治植物真菌病害中的应用

摘要

本发明公开了银杏内生真菌代谢产物在防治植物真菌病害中的应用，属于微生物农药技术领域。该发明包括：银杏组织的准备、表面消毒与无菌检测，内生真菌的分离与培养，有效菌株的筛选、发酵及杀菌药物的制备等步骤。本发明首次将银杏内生真菌发酵代谢产物应用于植物真菌病害的防治，为农用杀菌剂的开发增添了一个新的途径。

主权项

1、银杏内生真菌代谢产物在防治黄瓜立枯病菌(Rhizoctonia solani)、番茄早疫病菌(Alternaria solani)或葡萄炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)中的应用；所述的银杏内生真菌代谢产物可用下述方法制备：(1)银杏组织的准备：采集银杏根、茎、叶、果肉、果仁；(2)银杏组织的表面消毒与无菌检测：将步骤(1)银杏组织经表面消毒后，直接种植于PDA培养基平皿上，置26℃～28℃恒温箱培养，从中选出表面无任何菌种生长的组织；(3)银杏组织内生真菌的分离培养：将步骤(2)的无菌组织在无菌条件下切割成小片移植于PDA培养基上，置26℃～28℃恒温箱培养，至样品周围长出菌丝时，采用尖端菌丝挑取法，挑取形态不同的菌落，经纯化后转接到PDA斜面培养基，备用；(4)内生真菌液体发酵培养基的配制：其各组分与每升所含的质量为蛋白胨0-5.5g、玉米粉1-8g、麸皮0-10g、可溶性淀粉0-10g、葡萄糖1-8g、黄豆饼粉1-9g、CaCO3 0.5-2.5g、NH4NO3 0.1-1.2g、MgSO4 0.1-0.9g、KH2PO40.1-0.9g；(5)内生真菌发酵培养：将步骤(4)液体发酵培养基分装在三角瓶中，用接种钩挑取少许经步骤(3)分离纯化的内生真菌菌丝于培养瓶中，置26℃～28℃摇床，200r/min，振荡培养4～5天，发酵液经5000r/min离心10min，取发酵上清液；(6)有效菌株筛选：取步骤(5)各上清液与冷却至50℃的PDA培养基按毫升体积1∶9混匀于无菌培养皿内，凝固后在每个培养基平面放1个直径为4mm的供试菌饼，置28℃培养箱培养后，计算各菌株发酵液对供试病原菌的抑制率，从中筛选出高效抑制率的内生真菌菌株，备用；(7)银杏内生真菌代谢产物在防治植物真菌病害中的应用：将步骤(6)筛选出的高效菌株，采用步骤(4)液体发酵培养基在发酵罐中发酵培养，以其获得大量的银杏内生真菌代谢产物。