SISTEMAS DE EXPRESION DE VIRUS RECOMBINANTES DE ARN CON CADENA NEGATIVA Y VACUNAS.

摘要

SE DESCRIBEN MODELOS DE ARN DE VIRUS DE FRAGMENTOS NEGATIVOS RECOMBINANTES QUE PUEDEN SER UTILIZADOS PARA EXTRESAR PRODUCTOS DE GENES HETEROLOGOS Y/O PARA CONSTRUIR VIRUS QUIMERICOS. LA POLIMERASA VIRAL DE LA GRIPE, QUE SE PREPARO CON UNA CANTIDAD REDUCIDA DE ARN VIRAL, SE UTILIZO PARA COPIAR PEQUEÑOS MODELOS DE ARN PREPARADOS A PARTIR DE SECUENCIAS CODIFICADAS POR PLASMIDOS. LAS FORMACIONES DE MODELOS QUE SOLO CONTENIAN EL EXTREMO 3'' DEL ARN GEROMICO RESULTARON QUE SE PODIAN COPIAR DE MANERA EFICAZ, LO QUE INDICABA QUE EL PROMOTOR SOLO ESTABA DENTRO DEL TERMINO 3'' DEL NUCLEOTIDO 15. LAS SECUENCIAS NO ESPECIFICAS DE LOS TERMINOS VIRALES DE LA GRIPE NO SE COPIARON Y, SORPRENDENTEMENTE, LOS TERMINOS QUE CONTENIAN ARN SUB S IDENTICOS A LOS DEL CRNA DE SIGNO MAS (+) SE COPIARON A BAJOS NIVELES. LA ESPECIFICIDAD PARA EL RECONOCIMIENTO DEL PROMOTOR DEL SIGNO DEL VIRUS SE SIGUIO DEFINIENDO MEDIANTE UNA MUTAGENESIS ESPECIFICA DEL LUGAR . TAMBIEN SE DESCUBRIO QUE SE NECESITABAN NIVELES MAYORES DE PROTEINA VIRAL PARA CATALIZAR TANTO LA SINTESIS DEL ARN SIN CEBADO Y CEBADA DE ENDENUCLEASA REVESTIDA DESDE ESTOS PATRONES MODELO ASI COMO DESDE ARN SUB S DE LONGITUD GEROMICA. ESTO INDICO QUE ESTE SISTEMA RECONSTITUIDO TENIA PROPIEDADES CATALITICAS MUY PARECIDAS A LAS DE LOS PNR SUB S VIRALES NATIVOS. SE OBTUVIERON AL RAS NIVELES DE EXPRESION DE UN GEN HETEROLOGO UTILIZANDO LAS CONSTRUCCIONES Y METODOS DESCRITOS.