一种灵芝杂交育种方法

摘要

一种灵芝杂交育种方法，包括亲本菌株选择、菌丝培养、再生培养基配制、菌丝裂解、单细胞再生、单核细胞分离、单核体杂交，杂交菌株培养并筛选。由于灵芝孢子的细胞壁很厚，在人工条件下几乎不萌发，难以进行杂交育种，本发明通过菌丝裂解形成单细胞，并萌发成单核菌株进行杂交育种，整个过程不超过20天即可完成，单核细胞的获得率不低于35％，具有杂交育种的速度快、成功率高、后代遗传性状稳定等优点。

主权项

1、一种灵芝杂交育种方法，包括灵芝亲本菌株选择、菌丝培养、再生培养基配制、菌丝裂解、单细胞再生、单核细胞分离、单核体杂交，杂交菌株培养并筛选，其特征在于(1)所述菌丝裂解，是将经过2次活化、处于生长对数期中期的亲本液体菌丝分别放入离心管中，离心后取沉淀，并加入无菌水清除菌丝外壁的杂质，再用稳渗液清洗，将清洗后的菌丝悬浮于溶壁酶液，于30℃的循环水浴锅中恒温水浴至单细胞完全释放，得单细胞裂解液；(2)所述单细胞再生，即离心单细胞裂解液，取沉淀，并用再生培养基清洗沉淀至单细胞外不含溶壁酶，然后用再生培养基稀释至单细胞浓度为2～3个/低倍镜视野，将单细胞稀释液涂布至再生培养基平板中，并倒置培养皿于25℃培养箱中培养，至单细胞开始萌发；(3)所述单核细胞分离，是从单细胞萌发的培养皿中挑取单个已长出芽管的单细胞连同培养基放入斜面培养基中，于25℃培养，长出3～5cm的菌落时，镜检挑取无锁状联合的菌株。