生物催化制备(R)－4,4,4－三氟－3－羟基丁酸乙酯的方法

摘要

生物催化制备(R)－4，4，4－三氟－3－羟基丁酸乙酯的方法，属于生物不对称还原制备手性卤代羟基丁酸酯技术领域。本发明利用筛选并保藏的高对映体选择性羰基还原酶的产生菌葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)等，在优化条件下发酵产酶，湿菌体在单一水相体系中，以4，4，4－三氟乙酰乙酸乙酯为底物，并添加葡萄糖和大孔树脂，制备(R)－4，4，4－三氟－3－羟基丁酸乙酯。当底物4，4，4－三氟乙酰乙酸乙酯浓度为30g/L，转化6h，得到产物(R)－4，4，4－三氟－3－羟基丁酸乙酯浓度26.2g/L、光学纯度88.9％e.e、摩尔转化率87.3％，在整个反应过程中不需要添加辅酶。

主权项

1.生物催化制备(R)-4，4，4-三氟-3-羟基丁酸乙酯的方法，其特征是以选择性羰基还原酶产生菌为出发菌株，在单一水相体系中，以4，4，4-三氟乙酰乙酸乙酯为底物，在酶反应过程中补充添加底物，并添加葡萄糖和大孔树脂，制备(R)-4，4，4-三氟-3-羟基丁酸乙酯，步骤如下：(1)菌株：葡萄汁酵母(Saccharomyces uvarum)ATCC26602、CICC 1023、CICC 1328、CICC 1494、CICC 1445、CICC 1625，酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)AS2.1429、AS2.23、AS2.146、AS2.240，异常汉逊氏酵母(Saccharomyces Hansenula anomala)AS2300；(2)湿菌体的培养：培养基组成以g/L计为：醋酸钠10～100，玉米浆10～100，磷酸二氢钾1～10，硫酸镁0.1～1，pH为4～9，温度20～40℃，培养1～5天，发酵液过滤获得湿菌体；(3)配制反应体系：以4，4，4-三氟乙酰乙酸乙酯为底物，用0.1M，pH 5.0的柠檬酸缓冲液配制成反应体系，底物浓度以g/L计为10～500；(4)酶转化反应：在反应体系中加入湿菌体，加湿菌体量为1～20g/g底物，酶反应温度为20～50℃，反应时间为1～20小时；在酶反应过程中补充添加底物，并添加葡萄糖和大孔树脂；(5)转化液后处理：转化液过滤或离心分离菌体，清液以乙酸乙酯萃取，吸附树脂用乙酸乙酯洗脱，合并萃取液和洗脱液，再脱水，脱色，蒸发回收溶剂，得到无色油状液体(R)-4，4，4-三氟-3-羟基丁酸乙酯。