一种动物源细菌四环素类药物耐药基因多重PCR检测技术

摘要

本发明涉及一种动物源细菌四环素类药物耐药基因多重PCR检测技术，该方法包括扩增待测细菌耐药基因的三对PCR引物以及PCR模板制备试剂和细菌耐药基因多重PCR扩增试剂，利用该多重PCR检测技术能扩增待测菌株四环素类药的耐药基因。它具有灵敏度高、特异性高、应用范围广，结果准确可靠的特点。

主权项

1、一种动物源细菌四环素类药物耐药基因多重PCR检测技术，含有PCR模板制备试剂和细菌耐药基因多重PCR扩增试剂，其特征在于：所述PCR模板制备试剂是由洗涤液、样品处理液组成，所述细菌耐药基因多重PCR扩增试剂包括10倍PCR缓冲液组分为50mM KCl、pH8.3的10mM Tris.HCl和0.01％明胶，浓度均为2.5mmol/L的dGTP、dCTP、dATP和dTTP，浓度为25mM/LMgCl2，三种耐药基因即tetA基因、tetC基因和tetM基因的特异性上下游引物浓度均为25mmol/L，浓度为2.5U/ULTaq DNA聚合酶和超纯水。所述动物源细菌四环素类药物耐药基因多重PCR扩增试剂各组分的终浓度如下：1倍PCR缓冲液，dGTP、dCTP、dATP和dTTP的终浓度均为0.25mmol/L，MgCl2的终浓度为2.5mM/L，四环素类药物耐药基因tetA、tetC、tetM的终浓度分别为0.5mmol/L、0.3mmol/L、0.4mmol/L，Taq DNA聚合酶的终浓度为1.75U/100UL。