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<p>Un método para evaluar la actividad enzimáti- ca de UDP-N-acetilglucosamina:N- acetilmuramil(pentapéptido)-P-P-undecaprenol-N- acetilglucosamina transferasa, y opcionalmente también la actividad enzimática de fosfo-N-acetilmuramil- pentapéptido translocasa, método el cual comprende las etapas de: (1) incubar una mezcla de reacción que comprende pi- rofosfato de undecaprenol-N-acetilmuramilpentapéptido (Lípido I), UDP-N-acetilglucosamina marcada isotópi- camente (UDP-GlcNAc), una fuente de iones de metal divalente, y una fuente de la enzima transferasa, y en el que las membranas celulares bacterianas repre- sentan una fuente de uno o más de fosfato de undeca- prenilo, enzima translocasa y enzima transferasa, y en el que las membranas celulares bacterianas se ob- tienen a partir de un mutante deficiente en enzima peptidoglicano transglicosilasa en condiciones ade- cuadas para que se produzca la síntesis de undecapre- nol-pirofosforil-N-acetilmuramilpentapéptido-N- acetilglucosamina (Lípido II); (2) detener la reacción de la etapa (1); (3) añadir un agente fluorescente a la mezcla de re- acción de la etapa (2); y (4) medir la energía de la luz emitida por el agente fluorescente.</p> |
