METHOD FOR THE SELECTIVE ENRICHMENT OF DOUBLE-STRANDED DNA FROM NUCLEIC ACID MIXTURES

摘要

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Abreicherung unerwünschter Nukleinsäurebestandteile von doppelsträngiger DNA, insbesondere super-coiled Plasmid- DNA. Das erfindungsgemäße Verfahren ist gekennzeichnet durch die Schritte (a) Zurverfügungstellen eines Gemischs enthaltend vollständig und/oder teilweise doppelsträngige Nukleinsäuren sowie gegebenenfalls einzelsträngige Nukleinsäuren; (b) Resuspendieren des unter Punkt (a) genannten Gemischs in einem wäßrigen, niedermolaren Puffersystem mit niedriger Ionenstärke und geringer Pufferwirkung; (c) Einstellen von Bedingungen in dem Gemisch gemäß Schritt (b), bei welchen die vo llständig und/oder teilweise doppelsträngigen Nukleinsäuren denaturiert werden; (d) weitere Zugabe von Puffer und einer Polymerkomponente zu dem Gemisch gemäß Schritt (c); (e) Inkubation des Gemischs gemäß Schritt (d) für einen Zeitraum, der ausreicht, ein wäßriges Zwei- Phasensystem mit einer Ober- und einer Unterphase auszubilden; und (f) Entfernen der Einzelstrang-Nukleinsäure enthaltenden Oberphase und Auffangen der Doppelstrang- Nukleinsäure aus der Unterphase.