| 主权项 |
1.一种大肠杆菌宿主细胞,包括一核酸序列,该核酸 序列包括一启动子以及一编码二磷酸异戊烯基酯 异构、二磷酸牻牛儿基牻牛儿基酯合成、1- 脱氧木酮糖5-磷酸合成、八氢番茄红素合成 或八氢番茄红素去饱和的核酸序列;该核酸序列 可操作性地连接至该启动子,该启动子受到ntrC控 制;该宿主细胞系以遗传工程技术,将g1nL删除或突 变,使该启动子可在氮存在的条件下,受到乙醯磷 酸的调控。 2.如申请专利范围第1项所述之大肠杆菌宿主细胞, 其中该启动子是glnAp2。 3.如申请专利范围第1项所述之大肠杆菌宿主细胞, 其中该类异戊二烯是类胡萝卜素。 4.如申请专利范围第1项所述之大肠杆菌宿主细胞, 其中该类异戊二烯是番茄红素、-胡萝卜素、虾 青素或其前驱物之一种。 5.如申请专利范围第1项所述之大肠杆菌宿主细胞, 其中更包括一编码磷酸烯醇丙酮酸合成醇之核酸 。 6.如申请专利范围第1项所述之大肠杆菌宿主细胞, 其中该宿主细胞更包含一核酸卡匣,其包括编码磷 酸烯醇丙酮酸合成之核酸序列,可操作性地连接 至一启动子,该启动子受到乙醯磷酸的浓度而调控 。 7.一种在一细菌宿主细胞中制造类异戊二烯的方 法,包括提供如申请专利范围第1项所述之宿主细 胞;以及 在乙醯磷酸启动该启动子的条件下,培养该宿主细 胞。 8.如申请专利范围第7项之所述之方法,其中该培养 条件包括氮丰富的条件。 9.如申请专利范围第7项之所述之方法,其中该培养 条件包括生长至后对数生长期。 10.如申请专利范围第7项之所述之方法,其中该培 养条件包括生长至静止期。 11.如申请专利范围第7项之所述之方法,其中该宿 主细胞所生产的类异戊二烯是番茄红素、-胡萝 卜素或虾青素。 12.如申请专利范围第11项之所述之方法,其中该类 异戊二烯为番茄红素,该启动子为glnAp2,以及至少 生成5mg L-1番茄红。 13.一种在如申请专利范围第1项所述之宿主细胞中 制造番茄红素的方法,包括表现异源性的1-脱氧-D- 木酮糖5-磷酸合成、异源性的二磷酸牻牛儿基 牻牛儿基酯合成、异源性的八氢番茄红素合成 以及异源性的八氢番茄红素去饱和。 14.一种套组,包括: (1)一核酸序列,该核酸序列包含受ntrC控制的启动 子以及一编码二磷酸异戊烯基酯异构、二磷酸 牻牛儿基牻牛儿基酯合成、1-脱氧木酮糖5-磷酸 合成、八氢番茄红素合成、八氢番茄红素去 饱和或番茄红素环化的序列,使得该启动子可 在一定义的宿主细胞中,受到乙醯磷酸的调控; (2)以及该定义的宿主细胞是以遗传工程技术进行 glnL的删除或突变之修饰。 15.一种核酸序列,包括一启动子以及一编码二磷酸 异戊烯基酯异构、二磷酸牻牛儿基牻牛儿基酯 合成、1-脱氧木酮糖5-磷酸合成、八氢番茄红 素合成或八氢番茄红素去饱和序列,该序列可 操作性地连接至该启动子;该启动子受到ntrC控制, 使得该启动子可在组胺酸蛋白激不存在的环境 下,受到乙醯磷酸的调控。 16.如申请专利范围第15项所述之核酸序列,其中该 类异戊二烯是类胡萝卜素。 17.如申请专利范围第15项所述之核酸序列,其中该 类异戊二烯是番茄红素、-胡萝卜素、虾青素或 其前驱物之一种。 18.如申请专利范围第15项所述之核酸序列,其中该 启动子是glnAp2。 19.一种大肠杆菌宿主细胞,包括: (1)一不活化之组织胺酸蛋白激基因; (2)一核酸序列包括一编码磷酸烯醇丙酮酸合成 核酸序列,其可操作性地连接至一glnAp2启动子,该 启动子系受到ntrC和乙烯磷酸控制;以及 (3)核酸序列编码一二磷酸牻牛儿基牻牛儿基酯合 成、一八氢蕃茄红素合成和一八氢蕃茄红素 饱和。 20.如申请专利范围第19项所述之大肠杆菌宿主细 胞,更包括一编码二磷酸异戊烯基酯异构之核酸 。 21.如申请专利范围第20项所述之大肠杆菌宿主细 胞,其中该编码二磷酸异戊烯基酯异构之核酸系 操作性地连接至一glnAp2启动子。 22.如申请专利范围第19项所述之大肠杆菌宿主细 胞,其中该大肠杆菌宿主细胞表现一蕃茄红素。 23.如申请专利范围第19项所述之大肠杆菌宿主细 胞,其中该蕃茄红素的表现量大于5 mg/L。 |
