| 主权项 |
1.一种可生产抗口蹄疫病毒单源抗体之融合瘤细 胞株,其特征在于其所生产之单源抗体可与猪型口 蹄疫病毒之VP1蛋白抗原专一性结合,且不会与其它 水性疾病病毒、中国台湾猪场常见病毒产生交叉反 应;其系以猪型口蹄疫病毒O/TWN/97活毒作为抗原免 疫Balb/c小鼠,利用该Balb/c小鼠脾脏细胞与骨髓瘤细 胞融合为融合瘤细胞株,其为于2005年1月14日寄存 于食品工业发展研究所寄存编号为BCRC 960225之融 合瘤细胞株T5H-12。 2.如申请专利范围第1项所述之融合瘤细胞株,其中 所生产之单源抗体可与猪型口蹄疫病毒之VP1蛋白 抗原专一性结合,而该VP1蛋白含有RGD motif的29个胺 基酸序列之胜。 3.一种制备如申请专利范围第1项所述之融合瘤细 胞株之方法,其包括下列步骤: (1)将猪型口蹄疫病毒O/TWN/97活毒作为抗原注射入 小白鼠腹腔及脾脏,并经适当时间之追加免疫注射 ; (2)取出小白鼠脾脏细胞与骨髓瘤细胞株进行融合, 并以适当培养基制备融合瘤细胞株培养液;及 (3)取前述融合瘤细胞株培养液,筛选出可生产抗( 猪型)口蹄疫病毒之VP1蛋白之融合瘤细胞株。 4.如申请专利范围第3项所述之方法,其中步骤(3)所 述之VP1蛋白含有RGD motif的29个胺基酸序列之胜(P 29)。 5.一种抗口蹄疫病毒单源抗体,其特征在于其可与 猪型口蹄疫病毒之VP1蛋白抗原专一性结合,且不会 与其它水性疾病病毒、中国台湾猪场常见病毒产生 交叉反应;其系以猪型口蹄疫病毒O/TWN/97活毒作为 抗原,其为于2005年1月14日寄存于食品工业发展研 究所寄存编号为BCRC 960225之融合瘤细胞株T5H-12所 生产之单源抗体。 6.一种分离之抗口蹄疫病毒单源抗体,其特征在于 可与猪型口蹄疫病毒之VP1蛋白抗原专一性结合,且 不会与其它水性疾病病毒、中国台湾猪场常见病毒 产生交叉反应;其系以猪型口蹄疫病毒O/TWN/97活毒 作为抗原,可与于2005年1月14日寄存于食品工业发 展研究所寄存编号为BCRC 960225之融合瘤细胞株T5H- 12所生产之单源抗体竞争与口蹄疫病毒结合。 7.如申请专利范围第5项所述之单源抗体,其可与猪 型口蹄疫病毒之VP1蛋白中之RGD motif的29个胺基酸 序列之胜(P29)结合。 8.如申请专利范围第6项所述之单源抗体,其可与猪 型口蹄疫病毒之VP1蛋白中之RGD motif的29个胺基酸 序列之胜(P29)结合。 9.一种制备如申请专利范围第5或7项所述之抗猪型 口蹄疫病毒单源抗体之方法,其系包括大量培养如 申请专利范围第1或2项所述之融合瘤细胞株T5H-12, 收获培养液。 10.如申请专利范围第9项所述之方法,其中该大量 培养系于活体外进行细胞培养,收获细胞培养上清 液。 11.如申请专利范围第9项所述之方法,其中该大量 培养系于活体内以小白鼠腹腔注射产生腹水方式 进行,收获腹水。 12.如申请专利范围第10或11项所述之方法,其中所 收获之培养液可直接使用,或进一步纯化后再使用 。 13.一种检测动物是否受口蹄疫病毒感染之方法,其 包括下列步骤: (1)提供一测试槽,其测试槽表面上吸附一定量之标 准口蹄疫病毒蛋白; (2)提供适当浓度之如申请专利范围第5、6、7或8项 所述抗口蹄疫病毒之单源抗体溶液; (3)取受测动物之检体; (4)将受测动物之检体及步骤(2)之单源抗体溶液加 入该测试槽,使其与测试槽表面上之口蹄疫病毒蛋 白产生免疫反应; (5)测试槽经清洗后,加入讯号产生工具,其中该讯 号产生工具能操作性地与结合本发明之抗口蹄疫 病毒单源抗体结合而产生讯号; (6)依产生之讯号判断该受测动物是否受口蹄疫病 毒感染。 14.一种检测动物是否受口蹄疫病毒感染之套组,其 包括: (1)一测试槽,其上吸附一定量之标准口蹄疫病毒蛋 白; (2)适当浓度之如申请专利范围第5、6、7或8项所述 抗口蹄疫病毒之单源抗体溶液; (3)讯号产生工具,其中该讯号产生工具能操作性地 与结合本发明之抗口蹄疫病毒单源抗体上之标志 物质结合而产生讯号; (4)相关试剂及清洗剂。 15.一种检测液相检体中口蹄疫病毒含量之方法,包 括下列步骤: (1)提供一支持固相,其支持固相表面上吸附一定量 之如申请专利范围第5、6、7或8项所述抗口蹄疫病 毒之单源抗体; (2)将受测动物之检体施加于该支持固相上,使其与 测试槽表面上之单源抗体产生免疫反应; (3)加入讯号产生工具,其中该讯号产生工具能操作 性地与本发明之抗口蹄疫病毒单源抗体结合而产 生讯号; (4)依产生之讯号判断检体中口蹄疫病毒含量。 16.一种检测液相检体中口蹄疫病毒之套组,包含: (1)一支持固相; (2)如申请专利范围第5、6、7或8项所述抗口蹄疫病 毒之单源抗体,系附着于前述支持固相上; (3)讯号产生工具,其中该讯号产生工具能操作性地 与猪型口蹄疫病毒或其蛋白质片段结合,并与前述 (2)之附着于支持固相上之单源抗体结合而产生讯 号。 17.如申请专利范围第13或15项所述之方法,其中可 利用直接或间接免疫方法进行。 18.如申请专利范围第15项所述之方法,其中该支持 固相为微反应盘、微球体、杂交膜、或试纸。 19.如申请专利范围第13或15项所述之方法,其中该 讯号产生工具为过氧化氢、硷性磷酸、-半 乳醣甘、生物素或萤光标志。 20.如申请专利范围第14或16项所述之套组,其中可 利用直接或间接免疫方法进行。 21.如申请专利范围第16项所述之套组,其中该支持 固相为微反应盘、微球体、杂交膜、或试纸。 22.如申请专利范围第14或16项所述之套组,其中该 讯号产生工具为过氧化氢、硷性磷酸、-半 乳醣甘、生物素或萤光标志。 图式简单说明: 第一图系提供本发明猪型口蹄疫病毒单源抗体之 制备流程。 第二图系本发明猪型口蹄疫病毒单源抗体T5H-12之 间接免疫萤光染色结果。 第三图为本发明单源抗体T5H-12重链及轻链的 Isotyping结果。其中(A)为重链,(B)为轻链。 第四图为以rVP1对本发明猪型口蹄疫病毒单源抗体 T5H-12的酵素连结免疫分析法竞争抑制试验结果。 第五图为本发明猪型口蹄疫病毒单源抗体T5H-12之 放射性免疫沈降分析结果。 第六图为本发明猪型口蹄疫病毒单源抗体T5H-12之 组织化学染色检测口蹄疫病毒的结果。 |
