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1、一种鸡抗鸭病毒性肝炎蛋黄抗体制备方法，包括下列步骤：(a)将冻干保存的鸭病毒性肝炎病毒以1∶1000稀释后，稀释液56℃处理1小时，经0.22um微孔滤膜过滤除菌后，接种13-15日龄非免疫鸭胚尿囊腔，37℃孵育，弃去48小时内的死亡鸭胚，收集48-96小时内的死亡鸭胚，采集尿囊液及羊水；(b)将收获的尿囊毒液中加入0.1％甲醛溶液，37℃密闭灭活48小时；灭活完成后，按灭活毒液96份，吐温-80 4份配制，即为制苗用抗原；按油相3份、水相1份的比例取油相、水相搅拌均匀，加入高压均质机中，调节压力为35mpa，乳化制备成鸭病毒性肝炎灭活油乳剂疫苗，并加入1％硫柳汞溶液使之终浓度为万分之一；(c)以制备的鸭病毒性肝炎灭活油乳剂抗原颈部皮下注射0.5ml/只；2周后，以制备的鸭病毒性肝炎灭活油乳剂抗原颈部皮下注射1.0ml/只，进行强化免疫；间隔2周后用灭活油乳剂抗原再次强化免疫一次，颈部皮下注射2.0ml/只；以后间隔8周进行一次强化免疫，每次颈部皮下注射2.0ml/只；(d)第二次强化免疫后第7天开始，每隔三天抽样用琼脂扩散方法测定高免鸡蛋蛋黄中抗鸭病毒性肝炎特异抗体效价；蛋黄与生理盐水按1∶3(V/V)稀释后，加等体积三氯甲烷萃提，若上清液琼扩抗体效价达1∶64以上即可集蛋，用于制备鸭病毒性肝炎蛋黄抗体；(e)将蛋壳消毒，打蛋并充分除去蛋清、胚盘和系带，收集蛋黄；于蛋黄中加入3倍体积的生理盐水，充分搅拌均匀，然后在蛋黄液中加入与蛋黄等体积的三氯甲烷，充分振荡混合均匀，室温作用60分钟，以3500-4000rpm离心30分钟，收集上层清液备用；(f)在分离的上清液中加入终浓度为0.05％的甲醛溶液，充分搅拌混匀，37℃保温密封8-12小时；用0.22μm微孔滤膜过滤除菌，即得琼扩抗体效价达到1∶32及以上的鸡抗鸭病毒性肝炎蛋黄抗体。 |
