一种高通量检测环境中二恶英类化学物质的方法

摘要

本发明公开了一种高通量检测环境中二恶英类化学物质的方法。其步骤是：首先是探针的设计；其次是探针的退火；第三是探针的固定；第四是提取含有AhR和ARNT受体蛋白的SD小鼠肝脏胞液；第五是将SD小鼠肝脏细胞液与含有二恶英类化学物质待测样品混合；第六是FITC的荧光检测。根据荧光值增加的多少来确定样品中二恶英类化学物质的含量。本发明能快速准确的检测二恶英类化学物质，检测成本低，应用前景广泛。

主权项

1.一种高通量检测环境中二恶英类化学物质的方法，包括下列步骤：A、探针的设计：分别设计生物素修饰和异硫氰酸荧光素修饰探针，序列分别为5‘-TTTTTTTTTTGGCTCTTCTCACGCAACTCCG-3’和5’-CGGAGTTGCGTGAGAAGAGCC-3’，生物素修饰的目的是使探针能够利用生物素和链霉亲和素的结合作用固定在链霉亲和素修饰的384孔板上；B、探针的退火：将探针分别溶解于超纯水中，终浓度为10-20μM，将两探针等比例混合后90-96℃处理5-10min、50-60℃退火20-30min后，稀释至500pM使用；C、探针的固定：退火后的探针加入链霉亲和素修饰的384孔板，利用生物素和链霉亲和素的特异作用使探针在12-16℃下过夜或35-37℃1小时固定；D、提取含有芳烃化合物受体蛋白和芳烃化合物受体蛋白核转移因子的Sprague Dawley鼠肝脏胞液；E、将Sprague Dawley鼠肝脏胞液与含有二恶英或其结构类似物的样品混合，20-25℃避光作用1-2小时后，再与HEDGK缓冲液混合，将混合液加入固定有探针的链霉亲和素修饰的384孔板内，20-25℃避光反应1-2小时；F、异硫氰酸荧光素的荧光检测：采用Bio-Tet Multi-DetectionMicroplate Reader Synergy HT检测异硫氰酸荧光素的荧光值，根据荧光值确定待测样品中二恶英或其结构类似物的含量。