| 主权项 |
1.一种命名为Der p 11之尘蛋白,其系如序列识别 号:1所示之胺基酸序列。 2.一种含有编码尘蛋白Der p 11之核酸的表现载体 ,其中之编码尘蛋白Der p 11之核酸系如序列识别 号:2所示之核酸序列。 3.如申请专利范围第2项所述之表现载体,其中该载 体系pDp 11。 4.一种生产尘蛋白Der p 11的方法,其包括以下步 骤: 将一含有编码尘蛋白Der p 11之核酸的表现载体 引入一细胞中; 诱导该细胞表现该尘蛋白Der p 11;以及 收集并纯化该尘蛋白Der p 11; 其中该编码尘蛋白Der p 11之核酸系如序列识别 号:2所示之核酸序列。 5.如申请专利范围第4项所述之生产尘蛋白Der p 11的方法,其中该表现载体系pDp 11。 6.如申请专利范围第4项所述之生产尘蛋白Der p 11的方法,其中该细胞为大肠杆菌(E. coli)。 7.如申请专利范围第6项所述之生产尘蛋白Der p 11的方法,其中该细胞为大肠杆菌菌株TOP10。 8.如申请专利范围第4项所述之生产尘蛋白Der p 11的方法,其中该「诱导」步骤包括添加异丙基-右 旋-硫代半乳糖喃糖。 9.如申请专利范围第4项所述之生产尘蛋白Der p 11 的方法,其中该「纯化」步骤系以亲和性管柱方式 进行。 10.一种检测尘过敏的套组,其包括: (i)固体基质; (ii)尘过敏原蛋白Der p 11,其固定于该固体基质上 ,且系如序列识别号:1所示之胺基酸序列; (iii)封阻溶液,用以封阻该固体基质上未结合于尘 过敏原蛋白Der p 11的部分; (iv)二次抗体,其可专一性地与一抗过敏原抗体结 合; (v)清洗溶液;以及 (vi)一讯号产生工具,其可操作性地与该二次抗体 连结而产生讯号。 11.如申请专利范围第10项所述之检测尘过敏的 套组,其中该固体基质包括玻璃、矽晶片、陶瓷材 料、金属、或由有机分子聚合而成之聚合物,其中 该有机分子系择自苯乙烯、乙烯、丙烯、酯类、 丙烯酸、丙烯酸酯、烷基丙烯酸、及烷基丙烯酸 酯所组成之族群。 12.如申请专利范围第10项所述之检测尘过敏的 套组,其中该封阻溶液包括脱脂奶(skim milk)、牛血 清白蛋白(BSA)、酪蛋白或动物明胶之溶液。 13.如申请专利范围第10项所述之检测尘过敏的 套组,其中该清洗溶液包括磷酸盐缓冲溶液(PBS)、 三烃甲基胺基甲烷缓冲溶液(TBS)或含0.05% Tween 20之 磷酸盐缓冲溶液(TBS)。 14.如申请专利范围第10项所述之检测尘过敏的 套组,其中该讯号产生工具系择自放射性标记物、 萤光标记物、磷光标记物、冷光标记物及酵素所 组成之族群。 15.如申请专利范围第14项所述之检测尘过敏的 套组,其中该冷光标记物包括生物冷光标记物或化 学冷光标记物。 16.如申请专利范围第14项所述之检测尘过敏的 套组,其中该酵素系择自硷性磷酸酵素、过氧化氢 酵素及-半乳糖酸酵素所组成之族群。 17.如申请专利范围第16项所述之检测尘过敏的 套组,更包括一基质,其中该基质可与该酵素反应 而呈色。 18.如申请专利范围第14项所述之检测尘过敏的 套组,其中该讯号产生工具更包括一生物素以及一 抗生物素蛋白,该抗生物素蛋白可操作性地与放射 性标记物、萤光标记物、磷光标记物、冷光标记 物或酵素连结。 19.如申请专利范围第18项所述之检测尘过敏的 套组,其中该酵素系择自硷性磷酸酵素、过氧化氢 酵素及-半乳糖酸酵素所组成之族群。 20.如申请专利范围第19项所述之检测尘过敏的 套组,更包括一基质,其中该基质可与该酵素反应 而呈色。 21.一种检测尘过敏的方法,其包括以下步骤: 提供一表面固定有含尘过敏原蛋白Der p 11之固 体 基质,其中该尘过敏原蛋白Der p 11系如序列识 别号:1所示之胺基酸序列; 以一封阻溶液封阻该固体基质上未结合尘过敏 原蛋白Der p 11之部分; 将一个体之血清样品与该固体基质接触; 以清洗溶液进行清洗步骤; 提供一讯号产生工具,其可操作性地与一二次抗体 连结而产生讯号,其中该二次抗体系专一性地与抗 该尘过敏原蛋白Der p 11之抗体结合;以及 测量该讯号产生工具所产生之讯号,若讯号高于一 预设値,则代表该个体具有尘过敏。 22.如申请专利范围第21项所述之检测尘过敏的 方法,其中该固体基质包括玻璃、矽晶片、陶瓷材 料、金属、或由有机分子聚合而成之聚合物,其中 该有机分子系择自苯乙烯、乙烯、丙烯、酯类、 丙烯酸、丙烯酸酯、烷基丙烯酸、及烷基丙烯酸 酯所组成之族群。 23.如申请专利范围第21项所述之检测尘过敏的 方法,其中该封阻溶液包括牛血清白蛋白、酪蛋白 或动物明胶之溶液。 24.如申请专利范围第21项所述之检测尘过敏的 方法,其中该二次抗体包括抗IgE之抗体或抗IgG之抗 体。 25.如申请专利范围第24项所述之检测尘过敏的 方法,其中该抗体包括单株抗体或多株抗体。 26.如申请专利范围第21项所述之检测尘过敏的 方法,其中该清洗溶液包括磷酸盐缓冲溶液或三羟 甲基胺基甲烷缓冲液。 27.如申请专利范围第26项所述之检测尘过敏的 方法,其中该清洗溶液更包括一界面活性剂。 28.如申请专利范围第21项所述之检测尘过敏的 方法,其中该讯号产生工具系选择自放射性标记物 、萤光标记物、磷光标记物、冷光标记物及酵素 所组成的族群中。 29.如申请专利范围第28项所述之检测尘过敏的 方法,其中该冷光标记物包括生物冷光标记物或化 学冷光标记物。 30.如申请专利范围第28项所述之检测尘过敏的 方法,其中该酵素系选择自硷性磷酸、过氧化氢 及-半乳糖酸所组成的族群中。 31.如申请专利范围第30项所述之检测尘过敏的 方法,更包括加入一基质,其中该基质可与该酵素 反应而呈色。 32.如申请专利范围第21项所述之检测尘过敏的 方法,其中该讯号产生工具更包括生物素。 33.如申请专利范围第32项所述之检测尘过敏的 方法,其中该更包括加入一抗生物素蛋白,其可操 作性地与放射性标记物、萤光标记物、磷光标记 物、冷光标记物或酵素连结 34.如申请专利范围第33项所述之检测尘过敏的 方法,其中该酵素系选择自硷性磷酸、过氧化氢 及-半乳糖酸所组成的族群中。 35.如申请专利范围第34项所述之检测尘过敏的 方法,更包括一基质,其中该基质可与该酵素反应 而呈色。 图式简单说明: 第1图显示含有GST之rDer p 11(第1行,箭头所指存在) 以及rDer f 11(第2行,箭头所指存在)的SDS-PAGE分析结 果。 第2图显示Dp尘萃取物(由左而右第1行)、含有GST 之rDer p 11(第2行,分子量约为129 kDa,箭头所指位置) 、Df尘萃取物(第3行)及含有GST之rDer f 11(第4行, 分子量约为111 kDa,箭头所指位置)之西方墨点法分 析结果,探针系采用对Der p 11专一性的mAb642。 第3图显示以西方墨点法分析过敏病患血清IgE对不 含GST之rDer p 11(箭头所指位置)之反应情形。第3A图 显示依序由左至右分别以混合血清(P1),MAST(Dp)阳性 病患之血清(P2-P7)以及混合正常对照血清(N8)作为 探针之结果;第3B图显示依序由左至右分别以MAST(Dp )阴性之血清(P9-P16)作为探针之结果。每个a行代表 对Dp萃取物之IgE反应情形,且每个b行代表对rDer p 11 之IgE反应情形。 第4图显示以免疫点墨法(immunodotting)分析气喘及/ 或鼻炎病患以及健康成人血清中IgE分别对Dp(3g/ 点)及不含GST之rDer p 11(2g/点)之反应情形。第4A-4 C图显示分别分析36个气喘及/或鼻炎病患血清(P1-36 )的结果;第4D图显示分别分析12个健康成人之正常 对照血清(N37-48)的结果。 第5图显示本发明之表现载体pDp 11图谱。 |
