热渗透休克初步纯化重组人甲状旁腺激素融合蛋白的方法

摘要

本发明公开了一种渗透休克与热处理相结合简称热渗透休克初步纯化重组人甲状旁腺激素(PTH)融合蛋白以代替金属鏊合层析的方法。它的操作步骤如下，发酵液预处理：发酵液经离心后除去上清液得到菌体，菌体悬浮于高渗缓冲溶液中，充分搅拌后静置，PTH在菌体胞内；热渗透休克技术：将含有PTH的高渗溶液搅拌后离心的菌体混悬于低渗缓冲溶液中加热，处理后离心收集上清液，即可。本发明具有过程集成、工艺简单、生产周期短、操作方便、成本低等优点。

主权项

1一种热渗透休克初步纯化重组人甲状旁腺激素(PTH)融合蛋白的方法，其特征在于，包括如下操作步骤：1)发酵液预处理发酵液经过1000～15000rpm、1～30min离心，将离心后的含有PTH的菌体悬浮于20mmol/L三羟甲基氨基甲烷、pH7.5～9.0的缓冲溶液中，溶液中同时含有2.5～5mmol/L乙二胺四乙酸和质量比为20％～30％蔗糖；按每克菌体加入10ml～100ml高渗缓冲液计，溶液搅拌成混悬，然后在0～30℃下静置5min～60min；2)热渗透休克技术初步纯化重组人甲状旁腺激素融合蛋白：将静置后的含有PTH的高渗缓冲液低于30℃下以1000～15000rpm、离心1～30min，取离心后的菌体，将离心后的含有PTH的菌体悬浮于20mmol/L Tris-HCl、pH7.5～9.0的低渗缓冲液中，此溶液中含有2.5mmol/L EDTA、不含蔗糖；低渗缓冲液加入量与此前加入的高渗缓冲液量相同；待低渗缓冲液中菌体充分混合后，将此混悬溶液加热至80～100℃，并保持5～60min，最后将经热处理后的混悬溶液在4℃下以1000～15000rpm、离心5～60min收集离心后的上清液，即获得重组人甲状旁腺激素(PTH)融合蛋白初步纯化后的产品。