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<p>Método para diferenciar células estromales derivadas de tejido adiposo hacia células condrocíticas, que comprende: a) sedimentar dichas células estromales centrifugando de entre 50.000 a 5 millones de células a 500 x g durante de 2 a 20 minutos en tubos estériles que contienen un medio; b) disponer en placas células estromales aisladas a una densidad de 500 a 20.000 células / cm2 en un medio diferenciador; c) complementar dicho medio con i) un agente condroinductor capaz de activar cualquier ruta de transducción de señales celulares que condure al fenotipo de condrocito maduro, en el que el agente condroinductor es un glucocorticoide, individualmente, o en combinación con un agente seleccionado del grupo que consiste en: un miembro de la superfamilia del factor de crecimiento transformante beta; una molécula de matriz extracelular de colágeno; y un análogo de la vitamina A ii) un antibiótico iii) un complemento nutritivo con de un 1 a un 20% de suero fetal bovino o de un 1 a un 20% de suero de caballo o cualquier otra combinación equivalente sintética o biológica de proteínas; iv) ascorbato o análogo de la vitamina C relacionado; d) incubar dichas células a de aproximadamente 31ºC a 37ºC durante aproximadamente de 3 ¿ 4 semanas con un 5% de CO2 y de entre un 1% a un 20% de oxígeno; y, e) determinar el grado de diferenciación de las células aisladas.</p> |
