| 主权项 |
1.一种于基因转殖猪乳汁中表现人类第九凝血因 子与猪乳铁蛋白之方法,其步骤系包括: (a)构筑(i)一含有两种转殖基因的表现载体,其中, 前述两种转殖基因的DNA序列系可编码为人类第九 凝血因子及猪乳铁蛋白,且前述转殖基因系可连结 于一乳腺专一性启动子;或(ii)两种表现载体,其中 一种系含有编码人类第九凝血因子之DNA序列,且其 包含一连结至一具有乳腺专一性之启动子,另一个 则含有可编码猪乳铁蛋白之DNA序列,且其包含一连 结至一具有乳腺专一性之启动子,且前述两种表现 载体的混合比例为1:1; (b)将前述之转殖基因导入猪胚胎中,得到一含有转 殖基因之猪胚胎;及 (c)将前述含有转殖基因之猪胚胎移植至受胚母猪 中以发育成一基因转殖猪,以使人类第九凝血因子 及猪乳铁蛋白表现于该基因转殖猪之乳汁中。 2.如申请专利范围第1项所述之方法,其中步骤(a)系 可将人类第九凝血因子基因与猪乳铁蛋白基因构 筑于同一表现载体上或将人类第九凝血因子基因 与猪乳铁蛋白基因分别构筑于不同的表现载体。 3.如申请专利范围第1项所述之方法,若将人类第九 凝血因子基因与猪乳铁蛋白基因分别构筑于不同 的表现载体,则于步骤(a)与(b)之间进一步加入一混 合不同表现载体之步骤。 4.如申请专利范围第1项所述之方法,其中前述含有 第九凝血因子基因及/或含猪乳铁蛋白基因之表现 载体之构筑系包括: 5'调控序列,系具有乳腺表现专一性,并可调控人类 第九凝血因子基因与猪乳铁蛋白基因使其于基因 转殖猪之泌乳期间持续稳定表现;以及 前述第九凝血因子基因及/或含猪乳铁蛋白基因, 系位于5'调控序列之后并可接受其调控而表现。 5.如申请专利范围第1项所述之方法,其中前述转殖 之人类第九凝血因子基因与猪乳铁蛋白基因系可 藉由有性生殖而遗传给子代。 6.如申请专利范围第4项所述之方法,其中前述之5' 调控序列系为牛乳白蛋白启动子。 7.如申请专利范围第1项所述之方法,其中前述之基 因转殖猪之乳汁表现之人类第九凝血因子之浓度 系可达到200-500g/mL,且经纯化后活性至少可达到 人类血浆之90%。 8.如申请专利范围第1项所述之方法,其中前述之基 因转殖猪系可于泌乳期间持续稳定表现人类第九 凝血因子基因与猪乳铁蛋白。 9.如申请专利范围第1项所述之方法,其系可进一步 于步骤(c)之后加入步骤: (d)收集前述含有人类第九凝血因子与猪乳铁蛋白 之乳汁;以及 (e)由前述乳汁中分离出前述人类第九凝血因子与 猪乳铁蛋白,以便自基因转殖猪乳汁中取得前述人 类第九凝血因子与猪乳铁蛋白。 10.如申请专利范围第1项所述之方法,其中前述步 骤(b)之将转殖基因导入猪胚胎中之方法系为基因 注射法。 图式简单说明: 第一图系显示本发明之第一代基因转殖猪于泌乳 期间人类第九凝血因子之表现量。 第二图系显示本发明之第一代基因转殖猪于泌乳 期间人类第九凝血因子与猪乳铁蛋白之表现量。 第三图系显示本发明之基因转殖猪之子代于泌乳 期间人类第九凝血因子之表现量。 第四图系显示本发明之基因转殖猪与非基因转殖 猪之乳汁中猪乳铁蛋白表现量之差异。 第五图系显示本发明之基因转殖猪之乳汁中人类 第九凝血因子之活性。 |
