猪促卵泡激素β亚基基因单体型的分离鉴定方法

摘要

本发明涉及一种猪促卵泡激素β亚基基因单体型的分离鉴定方法，属于家畜分子生物学技术领域。方法步骤包括，提取猪的基因组DNA，猪促卵泡激素β亚基基因的PCR(聚合酶链式反应)扩增，扩增产物的多态性检测，单体型的构建及其与猪繁殖性状的相关性分析。本发明的特征是分离鉴定出一个新的猪促卵泡激素β亚基基因的单体型H21。本发明利用猪促卵泡激素β亚基基因的单体型与猪繁殖性状显著相关的特性，为猪的标记辅助选种和选配提供了新的分子标记方法。

主权项

1、一种猪促卵泡激素β亚基基因单体型的分离鉴定方法，其特征在于包括如下步骤：1)采集猪耳组织，利用苯酚/氯仿抽提方法提取基因组DNA；2)针对猪促卵泡激素β亚基基因的αTaq I单核苷酸多态性位点C/T，设计促卵泡激素β亚基基因特异性引物，进行PCR反应，得到扩增产物1；其中，所述的基因特异性引物具有5’-TTGCTGGAAAGCCATCTG-3’和5’-GGTACTTTCACGGTCTCG-3’的序列，所述的扩增产物1长度为300～2000bp，且含有猪促卵泡激素β亚基基因的αTaq I单核苷酸多态性位点C/T；3)针对猪促卵泡激素β亚基基因是否含有272bp的插入片段，设计猪促卵泡激素β亚基基因特异性引物，进行PCR反应，得到扩增产物2；其中，所述的基因特异性引物具有5’-CCTTTAAGACAGTCAATGGC-3’和5’-ACTGGTCTATTCATCCTCTC-3’的序列，所述的扩增产物2长度为100～2000bp；4)检测扩增产物1的αTaqI单核苷酸多态性位点C/T和扩增产物2是否含有272bp的插入片段的多态性；5)构建单体型，针对扩增产物的多态性用统计分析的方法共分离鉴定出4种单体型H12，H21，H11，H22；6)通过偏回归分析方法确定与猪繁殖性状相关的单体型，其中，单体型H21与初产活仔数显著正相关，携带有上述单体型H21的个体初产活仔数性状显著优于含有其它单体型的个体；其中所述的单体型H21在αTaq I单核苷酸多态性位点C/T为C，且不含有272bp的插入片段。