小麦低分子量麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法

摘要

本发明公开了一种小麦麦谷蛋白亚基低分子量的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，该方法对常用的蛋白凝胶电泳方法的基础上进行改进，去除了小麦高、低分子量麦谷蛋白中醇溶蛋白对分离效果的干扰，并且样品缓冲液中不使用有臭味的β巯基乙醇；丙烯酰胺凝胶分离胶使用交连度为2.6％的10％丙烯酰胺凝胶，降低分子筛孔度，一步同时分离高、低分子量亚基，达到了更好的分离效果；电极缓冲液采用0.4M甘氨酸，增大了缓冲液电泳的离子效应，配合凝胶清晰的分离出低分子量麦谷蛋白亚基；使用清水脱色即可，节约药品成本。该方法简单，高效，能够清晰的单向一步分离低分子量麦谷蛋白亚基。

主权项

1.一种低分子量小麦麦谷蛋白亚基的聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，其特征在于，包括如下步骤：1)小麦麦谷蛋白亚基的提取与处理首先将1/3种子研压破碎成粉末；然后使用体积分数50％异丙醇，去除醇溶蛋白和沉淀蛋白后加入缓冲液50ul，该缓冲液中含有24％的甘油，8％的十二烷基硫酸钠，0.012％溴酚兰的0.125MTris-Hcl，缓冲液的pH值为6.8，35℃～40℃水浴1h备用；2)单向一步分离高、低分子量谷蛋白亚基电泳A.采用电泳仪进行垂直板聚丙烯酰胺凝胶电泳，压条封边后，将交联度2.6％的10％pH8.8丙烯酰氨分离胶灌至胶板的4/5处，立即用蒸馏水或无水乙醇封顶，凝胶半小时以上；B.弃去封顶水或无水乙醇，用4％交联度1.3％的PH为6.8的丙烯酰氨浓缩胶灌满胶板，插入长城齿梳子，凝胶半小时以上；C.用Tris-甘氨酸电极缓冲液，其中含0.3％Tris，0.1％SDS，0.4M甘氨酸，pH值为8.3，在20mA恒压电泳11-12h。3)脱色用G250考马斯亮兰染色3h，清水脱色24h，即可清晰分离出低分子量麦谷蛋白亚基。