改变紫杉烷类和紫杉烷类相关化合物的生物合成的组合物和方法

摘要

本发明提供了苯丙氨酸氨基变位酶的分离的核酸和氨基酸序列以及纯化此酶的方法。本发明还提供了改变植物细胞培养物中化合物生物合成的方法。本发明尤其提供了改变紫杉烷类和紫杉烷类相关化合物的生产的方法。

主权项

1.从植物细胞纯化苯丙氨酸氨基变位酶的方法，包括：(a)制备植物细胞粗提物；(b)从粗提物中沉淀出蛋白；(c)通过以下步骤将苯丙氨酸氨基变位酶与其它沉淀的蛋白分离开：(i)在Mg2+存在下将含有沉淀的蛋白和pH7.0的缓冲液的溶液用亲和色谱处理；(ii)通过超滤法透析步骤(i)中的流出及洗涤得到的级分，使缓冲液变为pH至少达到9.0的缓冲液；并且(iii)对步骤(ii)中透析和超滤获得的级分进行亲和色谱分离；并且(d)将经步骤(iii)亲和色谱处理得到的纯化的苯丙氨酸氨基变位酶用含有0.1M NaCl的缓冲液洗脱下来。