人胚胎干细胞及其培养方法

摘要

本发明提供了一种在体外获得人胚胎干细胞系的方法。本发明还提供了用该方法获得的人胚胎干细胞系，尤其是人胚胎干细胞系SH－HES1，其保藏号为CCTCC－C200503。

主权项

1.一种在体外获得人胚胎干细胞系的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)消化除去囊胚的透明带，然后将整个囊胚放到由小鼠成纤维细胞制成的饲养层细胞上进行培养，原代培养液的配方是：DMEM，20％胎牛血清，0.06-0.2mmol/Lβ-巯基乙醇，0.06-0.2mmol/L非必需氨基酸，1-2mmol/L谷氨酰胺，30-60U/ml青霉素，30-60μg/ml链霉素；(2)在步骤1的细胞培养进行8-10天后，将细胞团块切成小块，再接种到新鲜的小鼠成纤维细胞饲养层细胞上进行培养，培养液配方为KO-DMEM，20％血清替代物0.06-0.2mmol/L β-巯基乙醇，0.06-0.2mmol/L非必需氨基酸，1-2mmol/L谷氨酰胺，30-60U/ml青霉素，30-60μg/ml链霉素，3-5ng/ml bFGF；(3)在步骤2的细胞生长到第4～8代时，除去培养液，在饱和湿度、37℃、5％ CO2下用0.05％胰酶-EDTA进行消化传代培养，分离得到人胚胎干细胞系。