发明名称 用于产生体细胞之培养系统
摘要 本发明系关于一种产生特定体细胞之活体外培养系统,含有特定分化因子及经分离出之脐带间叶细胞,以及视需要之培养基,其中该脐带间叶细胞于该特定分化因子之诱导下产生该特定体细胞,并提供一种产生特定体细胞之活体外培养方法。
申请公布号 TWI266803 申请公布日期 2006.11.21
申请号 TW091136133 申请日期 2002.12.13
申请人 傅毓秀;王怀诗 发明人 傅毓秀;王怀诗
分类号 C12N5/06(2006.01) 主分类号 C12N5/06(2006.01)
代理机构 代理人 邱琦瑛 台北市松山区民生东路3段138号13楼
主权项 1.一种产生特定体细胞之活体外培养系统,含有特定分化因子及经分离出之脐带间叶细胞,以及视需要之培养基,其中该脐带间叶细胞于该特定分化因子之诱导下产生该特定体细胞。2.根据申请专利范围第1项之活体外培养系统,其中该脐带间叶细胞系哺乳动物脐带间叶细胞。3.根据申请专利范围第2项之活体外培养系统,其中该脐带间叶细胞系人类脐带间叶细胞。4.根据申请专利范围第1项之活体外培养系统,其中该体细胞系衍生自内胚层、中胚层或外胚层。5.根据申请专利范围第1项之活体外培养系统,其中该体细胞系神经细胞。6.根据申请专利范围第1项之活体外培养系统,其中该体细胞系心肌细胞。7.根据申请专利范围第1项之活体外培养系统,其中该体细胞系心血管细胞。8.一种产生特定体细胞之活体外培养方法,其包括以特定因子诱导下使经分离出之脐带间叶细胞分化成该特定体细胞。9.根据申请专利范围第8项之活体外培养方法,其中该脐带间叶细胞系哺乳动物脐带间叶细胞。10.根据申请专利范围第9项之活体外培养方法,其中该脐带间叶细胞系人类脐带间叶细胞。11.根据申请专利范围第8项之活体外培养方法,其中该体细胞系衍生自内胚层、中胚层或外胚层。12.根据申请专利范围第8项之活体外培养方法,其中该脐带间叶细胞系以-巯基乙醇处理,以诱导分化成神经细胞。13.根据申请专利范围第8项之活体外培养方法,其中该脐带间叶细胞系培养于培养过神经细胞之10%FBS-DMEM中,以诱导分化成神经细胞。14.根据申请专利范围第8项之活体外培养方法,其中该脐带间叶细胞系以5-叠氮胞处理,以诱导分化成心肌细胞。15.根据申请专利范围第8项之活体外培养方法,其中该脐带间叶细胞系以5-叠氮胞处理,以诱导分化成心血管细胞。图式简单说明:图1表示脐带间叶细胞在2mM -巯基乙醇中培养48小时后,(A)NF及(B)NeuN之免疫染色结果。图2表示脐带间叶细胞在(A)FBS-DMEM培养基(控制组)及(B)培养过神经细胞之培养基中培养6天后之型态。图3表示脐带间叶细胞在培养过神经细胞之培养基中培养6天后,(A)NF及(B)NeuN之免疫染色结果。图4表示脐带间叶细胞以培养过神经细胞之培养基处理不同时间后,其表现NF之比例。图5表示脐带间叶细胞以培养过神经细胞之培养基处理后,GluR5、GluR6、GluR7及KA2之西方墨点法结果。图6表示脐带间叶细胞以培养过神经细胞之培养基培养9天后,其(A)parvalbumin(PV)及(B)calbindin-D28K(CB)之免疫染色结果。图7表示脐带间叶细胞以培养过神经细胞之培养基培养6天后,其GAD之(A)免疫染色及(B)西方墨点法结果。图8(A)表示经培养过神经细胞之培养基诱导之脐带间叶细胞在处理后第0、3、6及9天时,其细胞密度之改变(比例尺:100m);(B)表示脐带间叶细胞以培养过神经细胞之培养基处理后,以DAPI染色定量细胞密度。图9表示脐带间叶细胞以培养过神经细胞之培养基培养3天(3D)及9天(9D)后,以DAPI+BrdU双重染色及NF+BrdU双重染色之结果。图10表示脐带间叶细胞在(A)不提供细胞分化因子,及(B)提供细胞分化因子后,其C-肌钙蛋白I及F-肌动蛋白丝的表现之照片影像。
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