电穿孔转Ri质粒诱发红豆杉发根的方法

摘要

本发明公开了一种电穿孔转Ri质粒诱发红豆杉发根的方法，本发明原理是利用电击法转基因技术，把发根农杆菌中含有T－DNA的Ri质粒直接地转入宿主细胞——红豆杉细胞，并培养发根。省却了在自然状态下发根农杆菌转染的步骤，也就避免了多种自然因素的影响；使得诱导发根产生的宿主范围大大扩大。通过繁殖发根来生产紫杉醇。由于发根生长速度大大超过正常植物及培养细胞的生长速度，因此发根产物产量高，而且稳定，不褐化，具有很大潜力。

主权项

1、电穿孔转Ri质粒诱发红豆杉发根的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)、Ri质粒提取：按常规提取发根农杆菌(如：A4或15834)的Ri质粒；(2)、原生质体制备：取红豆杉的疏松愈伤组织继代培养的悬浮细胞制备原生质体；(5)、电穿孔转基因：在兼有电穿孔转基因所需成分与发根农杆菌感染红豆杉所需成分的电击缓冲溶液中，使Ri质粒进入原生质体的细胞内；把感染过程融于电击过程之中；(6)、原生质体培养：进行原生质体培养，选择转基因成功的细胞；(7)、发根培养：当原生质体形成小细胞团或愈伤组织后，转移到固体分化培养基上，生长发根；再将发根转移到液体培养基中扩增培养；(8)、收集发根。