人胰高血糖素相关肽－2类似物

摘要

本发明是人胰高血糖素相关肽－2类似物Pro－Pro－h[Gly²]GLP－2(1－35)。采用本室构建的一个新的长度30－70aa的活性多肽的融合表达制备技术平台，构建在大肠杆菌细胞内高效融合表达Pro－Pro－h[Gly²]GLP－2(1－35)的基因工程菌，融合蛋白表达量占细菌总蛋白的40％以上。在Pro－Pro－h[Gly²]GLP－2的N端设计一个酸敏感位点(Asp－Pro)，用酸切割融合蛋白可获得Pro－Pro－h[Gly²]GLP－2(1－35)，Pro－Pro－h[Gly²]GLP－2(1－35)在体内被二肽酶IV及PPCE酶切割生成高活性的h[Gly²]GLP－2(1－33)。重组菌经裂解→洗涤→尿素溶解→乙醇分级沉淀分离融合蛋白，60mmol/L盐酸水解融合蛋白，DEAE－52柱层析分离→HPLC分离获得Pro－Pro－h[Gly²]GLP－2(1－35)，用电喷雾质谱法测得其相对分子质量为3948Da。Pro－Pro－h[Gly²]GLP－2冻干后溶于PBS缓冲液中，对正常雄性SD大鼠(160g－200g)皮下给药14天，0.1，0.25，0.5mg/kg/day，与对照组相比，小肠重量显著增加，小肠绒毛增高。有可能用于改善短肠综合症，吸收障碍和吸收功能改变的胃肠疾病，放、化疗病人的营养吸收状况，具有很好的临床应用前景。

主权项

1.一种人胰高血糖素相关肽-2(hGLP-2)类似物Pro-Pro-h[Gly2]GLP-2(1-35)即Pro-Pro-h[Gly.sup.2]GLP-2(1-35)。其特征在于：该类似物相对分子质量3948Da，由Gly取代N端位置2的丙氨酸(Ala)残基，同时N端接加2个脯氨酸(Pro)残基，N端包含二肽酶IV及PPCE酶切位点。