以顺丙烯磷酸为底物的左旋磷霉素生物转化菌株筛选方法

摘要

本发明涉及生物转化/生物催化技术、微生物菌株筛选领域，具体为一种以顺丙烯磷酸为底物的左旋磷霉素生物转化菌株的筛选策略及方法。该筛选策略及具体操作方法在筛选过程中包括了初筛和复筛两个步骤。在初筛中采用了以顺丙烯磷酸为唯一碳源的选择性培养基，使样品中占绝大多数的不相关微生物被淘汰掉。复筛中以初筛中获得的菌株为出发菌株，采用以顺丙烯磷酸为底物的左旋磷霉素生物转化菌株固体培养基，进一步筛选出左旋磷霉素生物转化菌株。由于有了初筛中的先期淘汰，从而大大减少了复筛工作量，使筛选工作的整体效率大为提高。

主权项

1、一种以顺丙烯磷酸为底物的左旋磷霉素生物转化菌株筛选方法，其特征在于：包括初筛和复筛两个步骤，复筛过程中以初筛过程中所获得的菌株为出发菌株；在初筛中采用以顺丙烯磷酸为唯一碳源的选择性培养基，该选择性培养基选择性培养出那些能够以顺丙烯磷酸为底物进行生长的菌株；复筛所采用培养基是以顺丙烯磷酸为底物的左旋磷霉素生物转化菌株固体培养基；所述初筛步骤如下：1)顺丙烯磷酸唯一碳源选择性培养基按重量百分数计，顺丙烯磷酸唯一碳源选择性培养基配方如下：(NH4)2SO40.3％，KCl 0.1％，NaCl 0.2％，MgSO4·7H2O 0.02％，KH2PO4 0.05％，琼脂粉2％，维生素复合液0.1％，顺丙烯磷酸0.3～2.0％，余量为蒸馏水，将上述组分均匀混合，调pH 7.2-7.4，121℃灭菌20分钟，备用；2)初筛过程吸取土壤悬液，加到顺丙烯磷酸唯一碳源选择性培养基平板上，涂布均匀，倒置于37℃培养5～7天；3)初筛获得菌株的分离纯化并保藏菌种按重量百分数计，分离纯化培养基配方如下：(NH4)2SO4 0.3％，KCl 0.1％，NaCl 0.2％，MgSO4·7H2O 0.02％，KH2PO4 0.05％，琼脂粉2％，维生素复合液0.1％，酵母膏0.1％，顺丙烯磷酸0.3％，余量为蒸馏水，将上述组分均匀混合，调pH7.2-7.4，121℃灭菌20分钟；挑取在顺丙烯磷酸唯一碳源选择性培养基上生长的菌落，划线接种于上述分离纯化培养基斜面上进行纯化，然后再接种于相同培养基斜面上进行保藏；所述复筛步骤如下：1)以顺丙烯磷酸为底物的左旋磷霉素生物转化菌株固体培养基按重量百分数计，复筛中的顺丙烯磷酸为底物的左旋磷霉素生物转化菌株固体培养基配方如下：顺丙烯磷酸0.3～1.0％，牛肉膏0.5％，蛋白胨1％，NaCl 0.5％，甘油3％，NaVO3 0.02％，CoCl2 0.05％，琼脂1.8％，余量为蒸馏水，将上述组分均匀混合，调pH 7.2-7.4，115℃灭菌30分钟，备用；2)琼脂块的制备将上述培养基融化，静置凝固后，用打孔器打出琼脂块，然后在其表面接种初筛步骤中获得的待检测菌株，置于30℃，75％-85％相对湿度下培养4-5天。