发明名称 |
一种无桔霉素红曲霉基因工程菌的构建方法 |
摘要 |
一种无桔霉素红曲霉基因工程菌的构建方法,属于微生物基因工程领域。本发明提供了(1)来源于CICC5006的桔霉素编码基因pksCT序列;(2)构建CICC5006桔霉素基因的克隆载体pBpksCT和敲除载体pBpksCTHyg;(3)REMI介导CICC5006桔霉素基因敲除方法。利用本发明方法,可以用于阻断红曲霉中桔霉素的代谢途径,进而从根本上解决色素生产过程中桔霉素伴生和污染问题,保证红曲产品的安全性,达到改善红曲产品质量和深度开发的目的。 |
申请公布号 |
CN1283780C |
申请公布日期 |
2006.11.08 |
申请号 |
CN200510039138.3 |
申请日期 |
2005.04.28 |
申请人 |
江南大学 |
发明人 |
诸葛健;周礼红;方慧英 |
分类号 |
C12N1/15(2006.01);C12R1/66(2006.01);C12N15/80(2006.01);C12N15/10(2006.01);C12N15/66(2006.01);C12N15/31(2006.01);C07K14/38(2006.01);C12P21/02(2006.01) |
主分类号 |
C12N1/15(2006.01) |
代理机构 |
无锡市大为专利商标事务所 |
代理人 |
时旭丹 |
主权项 |
1.一种无桔霉素红曲霉基因工程菌的构建方法,其特征是:(1)引物设计:以GeneBank公布的M.purpureus桔霉素基因为基础设计引物,pksCT-F:5′-GGCCGCGGCCGCGCTTCTTACCAACTTCCCTT-3′,pksCT-R:5′-GGCCGTTAACACCTTCAGTCCGCTATCTATC-3′;(2)pksCT基因克隆:通过PCR技术,以CICC5006基因组DNA为模板,以pksCT-F、pksCT-R为引物扩增得到4.1kb的桔霉素基因片段命名为pksCT;(3)pBpksCT载体的构建:pksCT两端分别引入了Not I和Hpa I酶切位点,经纯化回收后分别用Not I和Hpa I酶切,插入pBluescript II(-)的Not I和Sma I位点,构建得到pBpksCT载体;(4)桔霉素基因敲除载体pBpksCTHyg的构建:将来自载体pCB10031.4kb的Hpa I酶切片段,该片段含有来自Aspergillus nidulans trpC基因的启动子和hygromycin B抗性基因hph序列,插入载体pBpksCT的Sma I位点,Sma I位点位于pksCT基因序列内2253bp处,构建得到红曲霉桔霉素敲除载体pBpksCTHyg;(5)REMI介导敲除:载体pBpksCTHyg通过REMI介导敲除宿主菌CICC5006桔霉素基因,构建得到无桔霉素红曲霉基因工程菌。 |
地址 |
214036江苏省无锡市惠河路170号 |