从活检分离和扩充心脏干细胞的方法

摘要

从人或动物组织活检样品分离、扩充和保存心脏干细胞以用于心肌或其它器官的细胞移植和功能修复的方法。细胞也可以在基因治疗中用于治疗遗传性心肌病，用于治疗缺血性心脏病和用于建立体外模型以研究药物。

主权项

1.获得能修复受损的心肌组织的干细胞的方法，其包括下述步骤：a)取心脏组织的活检标本，并将其保持在适当的培养基中；b)在适当的条件下，用温和的机械的和/或化学的和/或酶促技术处理标本，得到组织碎片，其大小足以允许培养基中存在的营养物的扩散；c)使组织碎片粘附到适当的固相支持体上，并将它们维持在含有合适的血清和/或生长因子的培养基中；d)使细胞生长，部分地或全部地更换培养基，直到形成多细胞结构，其弱粘附或不粘附到所述支持体上；e)从剩余的培养物中分离所述的多细胞结构；f)通过温和的解离处理所述的多细胞结构，直到大部分小的透亮的球形细胞脱附，但是维持它们的形态和功能特征；g)将细胞平板接种在用聚赖氨酸或其它促进培养物向支持体粘附的试剂处理的培养基质上，在至少含有用于哺乳动物细胞生长的极限必需组分的培养基中；h)可能重复步骤d)-g)至少一次；i)选择聚集成透亮的球形体结构(心球体)的细胞；l)通过它们的温和解离和新的形成，有选择地促进新心球体的形成；m)最后冷藏心球体，准备在融化后使用。