脑下垂体腺酸环化活化之胜(PACAP)受体3(R3)激动剂及其药理方法之用途

摘要

本发明提供于活体内具有刺激胰岛素以依赖葡萄糖的方式自胰脏β细胞释放功能之新颖胜。这些胰岛素促分泌素胜被证实于试管内及活体内刺激老鼠胰岛细胞之胰岛素释放。本发明胜为内源胰岛素分泌降低的病人，特别是2型糖尿病患者，提供新颖治疗。详言之，本发明之胜系分泌自与VIP-PACAP相关多之特定组群或其功能相等物。本发明也有关治疗哺乳动物代谢疾病之方法，包括投予该哺乳动物治疗有效量之胰岛素促分泌素胜。本发明同时揭示制造该等胜(包括重组胜及合成胜)之方法。

主权项

1.一种多,系选自由下列序列组成之群组:SEQ ID NOs:8,12,13,15,16,18,32,43,47,52,72,83,86及87且具下列通式 : HSDAVFTX1NYTX2LRKQX3KKYLX4 其中 当X1表示E、X2表示K且X3表示LAA时,则X4表示NDLKKGGT、 NDLLNGGT或NDLKKGGTSWCEP GWCR; 当X1表示D、X2表示R且X3表示LAA时,则X4表示NDIKKGGT、 NDIKK-NH2或NDIKKKRY; 当X1表示D、X2表示R且X3表示MAV时,则X4表示NSIKKGGT; 当X1表示D、X2表示R且X3表示MAA时,则X4表示NSIKK或 NSIKNKRY; 当X1表示D、X2表示R且X3表示VAA时,则X4表示QSIKK、 QSIKNKRY或QSIKKKR:或 当X1表示D、X2表示R且X3表示VAV时,则X4表示QSIKKKR。 2.一种多核酸,系编码如申请专利范围第1项之多 、或其简并变异体。 3.一种载体,包括如申请专利范围第2项之多核酸 。 4.一种宿主细胞,包括如申请专利范围第3项之载体 。 5.一种用于制造多之方法,包括: a)在适于表现该多的条件下,培养如申请专利范 围第4项之宿主细胞; b)从该宿主细胞培养液中回收该多。 6.一种用于治疗糖尿病之医药组成物,包括如申请 专利范围第1项之多与医药上可接受载剂之组合 。 7.一种用于藉由R3激动剂治疗之疾病或病症之医药 组成物,包括如申请专利范围第1项之多与医药 上可接受载剂之组合。 8.如申请专利范围第1项之多,其中该多由SEQ ID NO:18所示。 9.如申请专利范围第1项之多,其中该多由SEQ ID NO:32所示。 10.如申请专利范围第1项之多,其中该多由SEQ ID NO:43所示。 11.如申请专利范围第1项之多,其中该多由SEQ ID NO:47所示。 12.如申请专利范围第1项之多,其中该多由SEQ ID NO:52所示。 13.如申请专利范围第1项之多,其中该多由SEQ ID NO:72所示。 14.如申请专利范围第1项之多,其中该多由SEQ ID NO:83所示。 15.如申请专利范围第1项之多,其中该多由SEQ ID NO:86所示。 16.如申请专利范围第1项之多,其中该多由SEQ ID NO:87所示。 17.一种用作R3激动剂治疗哺乳动物代谢失调之医 药组成物,包括治疗有效量之选自包括SEQ ID NO:8、 SEQ ID NO:12、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:86及SEQ ID NO: 87所成组群之胜。 18.申请专利范围第17项之医药组成物,其中该代谢 失调为2型糖尿病。 19.如申请专利范围第17项之医药组成物,其中该治 疗有效量系从约0.1微克/公斤至约1毫克/公斤之范 围。 20.如申请专利范围第17项之医药组成物,其中该代 谢失调为葡萄糖耐力受损之糖尿病前期状态。 21.一种用于需要之哺乳动物中刺激胰岛素以依赖 葡萄糖的方式释放之医药组成物,其包含一种选自 包括SEQ ID NOs.:8,12,13,15,16,18,32,43,47,52,72,83,86及87之 多所成组群之多。 22.一种作R3激动剂治疗哺乳动物气喘之医药组成 物,包括治疗有效量之选自由SEQ ID NO:8、SEQ ID NO:12 、SEQ ID NO:13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、 SEQ ID NO:32、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:52、SEQ ID NO:72、SEQ ID NO:83、SEQ ID NO:86及SEQ ID NO:87所成组 群之胜。 23.一种纯化之抗体,其特异性地与如申请专利范围 第1项之多结合。 图式简单说明: 第1图描绘本发明请求的多SEQ ID NO:11至14、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO:21至26、SEQ ID NO:32至36、SEQ ID NO:40至 53、SEQ ID NO:57至61、SEQ ID NO:63至99、SEQ ID NO:102至119 、SEQ ID NO:121至137、SEQ ID NO:139至177、SEQ ID NO:179、 180、SEQ ID NO:183至202及SEQ ID NO:322至341之胺基酸序 列。 第2图为VIP变异体与VIP、PACAP38、GLP-1、EXENDIN-4等天 然多及R3选择性多实例之序列排列。保守性 基团以黑字体及深灰色背景表示,而保守性变化以 浅灰背景表示。 第3图为含有GST-胜融合体的典型质体之限制性 图谱。 第4A-4B图为显示GLP-1或R3P3对于试管内自老鼠胰岛 细胞释出胰岛素影响之图形。 第5图为显示R3P3胜对于葡萄糖消耗(disposal)影响 之图形。 第6图为显示PACAP及相关多对于Balb/C老鼠之肠中 水含量的影响之条形图。 第7图为显示1奈莫耳/公斤剂量之R3P3、R3P12、R3P13 、或GLP-1经由皮下投药途径加强老鼠的葡萄糖消 耗之条形图。 第8图描述编码本发明多的SEQ ID NO:54至56及203至 321多核酸序列。 前6个核酸表示Bam HI限制切割识别位置,接下 来为编码「IEGR」因子Xa识别位置的12个核酸。 最后6个核酸表示Xho或Eco RI限制切割识别位置 ,其之前为编码两个终止密码子的6个核酸。因 子Xa位置与终止密码子之间的核酸编码对应多 之胺基酸序列。将两个限制切割位置间之核 酸转殖至pGEX-6P-1载体(Amershm Pharmacia Biotech)上之对 应限制切割位置中。序列编号(SEQ ID NO)示于括弧 中。 第9图示出PACAP-27、VIP及受体选择性激动剂对于有 意识狗的心搏数之影响(参见实例15)。 第10图示出利用ELISA以使用R3P66 C-末端序列(Ac- CRKQVAAK KYLQSIKNKRY-COON)使兔子免疫所产生的多株抗 体检测R3P66的结果。