一种快速检测副溶血弧菌的方法

摘要

本发明涉及一种快速检测病原菌副溶血弧菌的方法。由弧菌属细菌引起的弧菌病(Vibriosis)对海水经济养殖动物的危害最大，是海水经济养殖动物最主要的细菌性疾病。副溶血弧菌是养殖石斑鱼、尖吻鲈、真鲷、高体鰤等鱼类的主要病原菌，传统的病原菌鉴定费时费力，近年国外已开始研究用核酸探针和PCR手段检测病原弧菌。本发明利用副溶血弧菌pR72H序列的特异性，通过DNA取样、双重PCR扩增、电泳观察等现代分子生物学手段，研制特异性高、重复性好且易于操作的病原菌副溶血弧菌快速检测方法。

主权项

1、一种快速检测病原菌副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的方法，其特征在于是利用副溶血弧菌pR72H序列的特异性设计引物，目的片段大小为387bp，引物序列如下：HdB1：5’-TGCGAATTCGATAGGGTGTTAACC；HdB2：5’-CGAATCCTTGAACATACGCAGC阳性对照大小为211bp，引物序列如下：HdX1：5’-GCAACGAGCGCAACCCTTATCHdX2：5’-CCAATGGACTACGACGCACTTTTT其中采用双重PCR技术，具体步骤如下：预变性： 92℃ 1min变性： 92℃ 30s复性： 55℃ 30s延伸： 72℃ 30s重复30个循环，72℃延伸10min。