一种检测土拉菌感染的免疫层析试纸及其制备方法

摘要

本发明公开了一种检测土拉菌感染的免疫层析试纸及其制备方法。本发明所提供的检测土拉菌感染的免疫层析试纸，包括吸水纸垫、紧密连接于所述吸水纸垫上面的硝酸纤维膜、紧密连接于所述硝酸纤维膜上面的含有金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针的金标垫和紧密连接于所述金标垫上面的样品垫；所述硝酸纤维膜载有相互分离的检测线和质控线，所述检测线为土拉菌多糖抗原，所述质控线为可和金黄色葡萄球菌蛋白A结合的抗体。本发明的检测土拉菌感染的免疫层析试纸及其制备方法与现有的其他方法相比，特异性强，更简便，更快速，更适于临床和特殊情况下现场使用。

主权项

1、一种检测土拉菌感染的免疫层析试纸，包括吸水纸垫、紧密连接于所述吸水纸垫上面的硝酸纤维膜、紧密连接于所述硝酸纤维膜上面的含有金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针的金标垫和紧密连接于所述金标垫上面的样品垫；所述硝酸纤维膜载有相互分离的检测线和质控线，所述检测线为土拉菌多糖抗原，所述质控线为可和金黄色葡萄球菌蛋白A结合的抗体；所述免疫层析试纸是按照如下方法制备的：1)制备土拉菌多糖抗原；用0.01MpH7.2的PB将该抗原和可与金黄色葡萄球菌蛋白A结合的抗体分别稀释至2mg/ml和2.5mg/ml，然后分别喷于硝酸纤维膜上形成相互分离的检测线和质控线，37℃干燥2-4小时，然后将其粘贴在吸水纸垫上；所述土拉菌多糖抗原按下述方法制备：将土拉弗朗西斯菌接种在葡萄糖半胱氨酸血琼脂培养基中，37℃培养48-96h，用无菌生理盐水洗下菌苔，水浴中加热至68℃，加入68℃的等体积90％酚溶液，继续在68℃搅拌30-40min分钟，取出冷却至室温，7000-8000rpm离心，吸出水层，PBS透析过夜，即得到土拉菌多糖抗原；2)制备金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针；将该探针溶于0.01M四硼酸钠缓冲溶液，然后将玻璃纤维膜或聚脂膜浸入上述探针溶液中，取出冷冻真空干燥18-32小时后，得到金标垫，将其粘贴在步骤1)中得到的上面喷有相互分离的检测线和质控线的硝酸纤维膜上；所述金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针，按下述方法制备：用水溶解氯金酸使其终浓度为0.01％，煮沸后每100ml氯金酸溶液进行以下操作：加入1％的柠檬酸三钠水溶液1.6ml，继续煮沸10-20min，用纯水恢复至100ml，冷却至室温后用K2CO3调pH至6-7，搅拌加入金黄色葡萄球菌蛋白A 0.7mg，15-20min后加入10％的聚乙二醇20000 2ml，继续搅拌30-40min，15000-16000rpm离心30-35min，弃上清，沉淀即为金黄色葡萄球菌蛋白A标记胶体金探针；3)在步骤2)中的金标垫上面再粘贴样品垫，得到检测土拉菌感染的免疫层析试纸。