一种基因改组的方法及所获得的重组基因和编码蛋白

摘要

本发明涉及基因指导进化的方法，具体地说是一种基因改组方法及其应用，利用了来自一个基因的单链DNA经过酶切的片段通过其3’端与另一个基因的同源性及5’端与自身基因的同一性的特征，先将反应分成两组，每一组先经过预重组，再将两组反应物混合，经过一系列PCR反应步骤，经过一轮反应实现基因间的改组。通过测序结果分析，该方法在明显优于以往基因改组方法，并特别适用于对同源性较低的基因进行改组；分别以来自于大肠杆菌和酿酒酵母的腺苷蛋氨酸合成酶基因metk和sam2为起始基因(其序列同源性仅为56％)验证了该方法的有效性，并获得了活性提高的重组酶。

主权项

1.一种基因改组的方法，其特征在于：1)选取两种线性双链基因A和B，基因的末端分别带有能产生切口为不同粘性凸出末端的内切酶识别序列，分别用ExoIII消化产生方向相反的两组单链DNA---A’和B’；2)经消化后，分别取其中部分，用DNaseI消化成小片段A”和B”，并进行纯化；3)将A’和B”及A”和B’分别混合，形成两个反应体系I和II，然后进行单向PCR；随后，在I体系中加入对应A’的5’端的反向引物，在II体系中加入对应B’的5’端的反向引物，分别反向扩增；4)将上述两个体系混合，经套叠PCR扩增出全长片段；选择目的大小的重组基因，进行筛选和表达。