重组人血管抑素K1－3的制备工艺及其制品在肿瘤治疗药物中的应用

摘要

本发明涉及一种人血管抑素K1－3的制备方法及其制品在抗肿瘤治疗中的应用。本发明在对天然人血管抑素的生成机制、分子特性和生物学活性进行深入系统研究的基础上，对重组人血管抑素的蛋白氨基酸序列进行了优选，并自行设计构建了重组人血管抑素的原核高效表达系统，使血管抑素K1－3的表达量达到工程菌可溶性蛋白的50％以上，同时建立了最适的纯化及复性工艺，使重组人血管抑素的纯度达99.9％以上并能正确折叠。由此获得的重组人血管抑素K1－3能抑制肿瘤新生血管的生成，并对多种肿瘤具有治疗作用。

主权项

1.一种制备重组人血管抑素K1-3的制备工艺，该工艺是由基因克隆、工程菌的诱导培养、重组产物的纯化和复性过程组成，其步骤如下：(1)通过PCR方法从人肝细胞中克隆了人纤溶酶原cDNA中Kringle1-3的cDNA片段，在克隆时对其N-端和C-端序列进行了优选。(2)将这一cDNA片段克隆入自行设计构建的原核表达载体pHB中，用重组载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，经筛选得到高效表达重组人血管抑素的基因工程重组子。(3)经发酵培养和诱导表达重组人血管抑素的菌体经超声裂解、离心洗涤包含体后将其溶解，之后经过阴离子交换层析、调酸稀释复性、阳离子交换层析、超滤浓缩及凝胶过滤等手段纯化而得到人重组血管抑素蛋白质纯品。