高比活HuG－CSF酵母表达载体、高产菌株及HuG－CSF生产方法

摘要

本发明涉及HuG－CSF分泌表达的酵母菌株HuG－CSF/pGAPZ α－A/GS115构建的关键技术、构建结果及利用此菌株生产HuG－CSF的纯化方法。本发明采用酵母分泌表达系统取代大肠杆菌包涵体表达系统，发酵液上清中的HuG－CSF蛋白含量占总分泌蛋白的80％以上，目标蛋白HuG－CSF不需要复性，其生物比活性可达到8.0×10⁸单位/毫克蛋白，毒副作用低；分离纯化过程中只需要将离心后的上清液直接过离子交换柱和疏水柱即可达到98％以上的纯度，大大简化了生产工序，降低了生产成本，在工业生产中应用将有良好的经济效益。

主权项

1、一种HuG-CSF酵母表达载体HuG-CSF/pGAPZα-A，其特征在于将克隆修饰的HuG-CSF基因插入pGAPZα-A之GAP启动子/α-factor信号肽下游位点，删除载体上Kex2位点Lys-Arg之后的Ste13位点Glu-Ala-Glu-Ala，构建成HuG-CSF分泌型表达载体HuG-CSF/pGAPZα-A。