污水中细菌的基因芯片检测方法

摘要

本发明涉及一种污水中细菌的基因芯片检测方法。本发明该方法步骤包括：目的细菌的选择、根据所选取的不同目的细菌的特征基因作为芯片检测的靶基因，针对不同细菌的特定基因分别设计PCR引物和种、属检测探针、根据所设计的检测探针，制备基因芯片、目的细菌的DNA的抽提、PCR扩增反应、PCR扩增反应产物的杂交、杂交后的产物清洗、干燥后扫描。本发明根据所选取的不同细菌的特征基因作为芯片检测的靶基因，针对不同细菌的特定基因分别设计PCR引物和种、属检测探针，所设计的引物具有良好的特异性，对目的细菌扩增效果良好，无非特异性扩增。纯细菌DNA的抽提方法简单易行，2h内即可抽提目的细菌的DNA且得率较高；PCR扩增和杂交方法、条件易于实施，杂交检测结果稳定，有利于该技术的实际应用。

主权项

1.一种污水中细菌的基因芯片检测方法，其特征在于该方法的具体步骤如下：a.目的细菌的选择；b.所选细菌的特异引物和种、属检测探针的设计：根据所选取的不同目的细菌的特征基因作为芯片检测的靶基因，针对不同细菌的特定基因分别设计PCR引物和种、属检测探针；c.根据所设计的检测探针，制备基因芯片；d.目的细菌的DNA的抽提；e.PCR扩增反应：用所抽提的目的细菌的DNA作为PCR扩增反应的模板，进行线性扩增：f.PCR扩增反应产物的杂交：按以下配方配制杂交体系进行杂交， 试剂 体积 6×杂交液 2μ Cy3(生物素) 1μl SACy3 1μl其中，杂交液的为：20×SSC 30ml，50×Denhart’s 10ml，10％SDS 5ml，10mg/ml Salmon DNA 1ml，去离子水54ml，充分混匀后，用0.45um滤膜去杂质；g.杂交后的产物清洗、干燥后扫描。