睾丸特异性蛋白50人源抗体的制备及用途

摘要

本发明提供一种睾丸特异性蛋白50人源单链抗体的制备方法，利用噬菌体抗体呈现技术，以人睾丸特异性蛋白50为靶抗原，通过免疫亲和筛选法对重组噬菌体人抗体可变区基因文库进行筛选。分离并克隆TSP50特异性单链抗体基因AI、AII和C8。继而把单链抗体基因AI、AII和C8分别插入到含有组氨酸尾的原核表达载体PelB中，转化Rosetta菌，通过IPTG诱导表达外源蛋白，将菌体裂解后用Ni－NTA柱亲和层析，得到纯化的单链抗体，ELISA鉴定其可以和TSP50全蛋白和50肽特异结合；并用基因工程的手段将此人源单链抗体大量表达。本发明还公开了睾丸特异性蛋白50人源单链抗体在女性乳腺癌等TSP50相关性疾病的诊断和治疗用途。

主权项

1.一种人源抗体AI，其氨基酸序列包含免疫球蛋白重链可变区和轻链可变区，二者通过连接链连接，所说的人源抗体与人TSP50蛋白有较强的结合活性，其氨基酸序列为：MAEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWV 50SAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLREDTAVYYCARR 100QRLRHYANNWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGSALSSELTQDPAVSVALG 150QTVRITCQGDSLRSYYASWYQQKPGQAPVLVIYGKNNRPSGIPDRFSGSS 200SGNTASLTITGAQAEDEADYYCNSRDSSGFVFGGGTKLTVVLGAA 245其中氨基酸残基77被P所替换的AI序列，其中氨基酸残基102-108(LRHYANN)被KSGRK所替换的AI序列，其中氨基酸残基99-108(RQRLRHYANN)被VRHRASRANL所替换的AI序列，其中氨基酸残基230被K或RV所替换的AI序列。