一种等温反应检测具序列特异性的DNA和RNA的方法

摘要

一种等温反应检测具序列特异性的DNA和RNA的方法，通过在特异探针中设计DNA切刻内切酶的识别位点，在DNA探针与目标序列杂交后，DNA切刻内切酶将探针切刻为两段，从而降低了其与目标序列结合的稳定性并与目标序列分离。目标序列因此能与另一完整探针再次杂交并被切刻内切酶切刻。如此循环。切刻下的小片段可应用凝胶电泳的方法、荧光识别仪、颜色变化、传感器、质谱、检验层析试条或微阵列系统来检测特定产物的存在。该方法可以在等温情况下使待检基因呈线性或指数增加，使反应在短时间内就能完成，因而具有快速、灵敏、特异、应用范围广等特点。可应用于包括动物、植物和微生物的基因检测。

主权项

1.一种等温反应检测目的基因方法，在恒温条件下探针与目标基因结合，后通过切刻内切酶作用来检测目的基因，其特征在于：设计单链DNA“报告探针”，所说的“报告探针”与目标基因序列的核酸切刻内切酶识别序列及及其周围序列部分互补，并可使切刻内切酶在报告探针切刻；按以下步骤进行目的基因检测：1.1、在待检测样品的DNA或RNA中加入“报告探针”及切刻内切酶，“报告探针”与含有切刻内切酶识别序列的目标基因序列杂交后两识别序列结合形成切刻内切酶识别位点，该位点仅可使切刻内切酶在“报告探针”链切刻，形成两段较短的片段，在此反应温度下，短片段形成的双链不稳定，会与“核验探针”脱落，成为5’部分“报告探针”和3’部分“报告探针”；1.2、被切刻的“报告探针”分离的目的基因，又与另一完整的“报告探针”杂交，重复1.1所述反应，产生新的5’部分“报告探针”和3’部分“报告探针”；1.3、通过检测产生的3’部分“报告探针”和/或5’部分“报告探针”显示是否有目的基因序列存在。