一种低丰度蛋白靶上一步除盐与富集的方法

摘要

本发明是一种通过疏水性聚合物微印迹技术与基质辅助激光解析离子化质谱联用，进行痕量蛋白或多肽的靶上一步除盐与富集的方法。微印迹的疏水性聚合物对蛋白质和多肽有很好的吸附富集效果，但是对无机盐和其他污染物吸附很少，利用固体表面液珠蒸发过程中的外流作用，被疏水性聚合物吸附的样品无需额外的洗脱除盐步骤就可实现除盐并直接进行MALDI－TOF－MS分析。本发明不仅成功实现了样品一步除盐与富集，而且具有灵敏度高、重现性好、通量高、耐盐能力强、经济和省时等特点，可广泛用于蛋白质组学领域。

主权项

1、一种低丰度蛋白靶上一步除盐与富集的方法，其特征在于具体步骤如下：(1)首先用疏水性聚合物在MALDI靶板每个样品池的中央部位形成均匀印迹涂层；(2)将0.3～1.0微升多肽或蛋白样品点覆在疏水性聚合物印迹涂层上，室温自然干燥，由于蛋白质或多肽与疏水性聚合物有很强的疏水性相互作用，从而被富集在印迹涂层表面；(3)将过量体积的有机基质溶液点覆在带有上述样品的疏水性聚合物印迹涂层上，过量的基质溶液会携带无机盐等与疏水性聚合物弱吸附的污染物、并扩散出印迹涂层至周围的不锈钢靶板区域，室温自然干燥后，印迹涂层表面形成样品和基质均匀细致的结晶；(4)被富集的样品直接用激光激发印迹涂层表面进行MALDI-TOF-MS分析；(5)根据质谱结果，鉴定多肽或蛋白质。