人源性胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂的基因工程生产方法

摘要

本发明公开了人源性胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂的基因工程生产方法。本发明采用真核分泌表达的方法来制备重组人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂，包括：(1)具有工程菌密码子偏好性人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂基因的合成以及表达载体的构建；(2)工程菌的构建及发酵；(3)重组人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂的制备与纯化。本发明采用基因工程技术制备重组人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂，克服了从人体组织中提取，成本高且来源少等缺点。

主权项

1、人源性胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂的基因工程生产方法，包括以下步骤：(1)按毕赤酵母密码子偏好性化学合成人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂基因，其核苷酸序列为：5’-GATTCTCTGGGTCGTGAAGCCAAATGTTATAACGAACTGAACGGTTGTACCAAAATTTATGATCCAGTTTGTGGTACCGATGGTAACACCTATCCAAACGAATGTGTTCTGTGTTTTGAAAACCGTAAACGTCAGACCTCTATTCTGATTCAGAAATCTGGTCCATGT-3’；(2)设计引物，以所合成的人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂基因为模板，进行PCR扩增；(3)将所获得的编码人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂的基因克隆在质粒中，进行DNA序列测序分析与所设计的人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂基因序列完全相符；(4)经序列分析后的人胰腺分泌型胰蛋白酶抑制剂基因克隆到商业化表达载体pPIC9K，转化甲醇酵母菌株KM71；(5)对甲醇酵母菌株KM71进行甲醇诱导表达。