安全连续封闭式细胞培养、病毒生产/灭活的方法

摘要

一种生物工程技术领域的安全连续封闭式细胞培养、病毒生产/灭活的方法，步骤为：1)接种细胞，悬浮培养，实现细胞的初级培养；2)流加新鲜培养基，同时泵出细胞悬浮液，维持细胞培养生物反应器稳定，保证细胞在反应器中的停留时间内扩增，实现细胞的连续培养；3)泵出细胞悬浮液至含有病毒的病毒增殖反应器，实现病毒在细胞中的初级感染增殖；4)随着细胞悬浮液的流入和含病毒上清液的流出，在维持整个系统动态平衡的过程中实现病毒的连续培养；5)收集从病毒增殖反应器中泵出的病毒上清液，灭活病毒，实现连续封闭培养细胞和灭活病毒。本发明便于自动化控制，标准化生产，且降低了污染机会和提高了生产安全系数。

主权项

1、一种安全连续封闭式细胞培养、病毒生产/灭活的方法，其特征在于，包含以下步骤：1)向细胞培养生物反应器中接种1～2×105cells/mL的细胞，悬浮培养，扩增至0.2～1.0×107cells/mL，对于微载体悬浮培养时，微载体上80～90％汇满细胞，实现细胞的初级培养；2)根据培养细胞的生长特性和生物反应器体积的大小，以0.3～1.0倍反应器工作体积/天的流速流加新鲜培养基，同时以同样流速泵出细胞悬浮液，维持细胞培养生物反应器稳定的同时，保证细胞在反应器中的停留时间内扩增至0.2～1.0×107cells/mL，对于微载体悬浮培养时，微载体上80～90％汇满细胞，实现细胞的连续培养；3)泵出细胞悬浮液至含有感染复数为2～10病毒的病毒增殖反应器，实现病毒在细胞中的初级感染增殖；4)随着细胞悬浮液的不断流入和病毒上清液的不断流出，在维持整个系统动态平衡的过程中实现病毒的连续增殖；5)用病毒收集罐收集从病毒增殖反应器中泵出的病毒上清液，灭活病毒，实现连续封闭培养细胞和灭活病毒。