| 主权项 |
1.一种使具有修饰cys-E-对偶基因之微生物菌株直 接发酵以制造非蛋白原L-胺基酸之方法,其特征为, 于发酵过程中,将适量之亲核化合物添加在发酵配 合料内,俾由微生物菌株制造非蛋白原L-胺基酸。 2.如申请专利范围第1项之方法,其中在发酵作用终 止时,系用习知之方法将该非蛋白原L-胺基酸自发 酵物配合料中分离出来。 3.如申请专利范围第1或2项之方法,其中所加亲核 化合物之一个基系选自一个由下列诸基所组成之 族群 4.如申请专利范围第1或2项之方法,其中所加亲核 化合物系选自由下列诸物所组成之族群: -具有化学通式(1)之硫醇: 其中R1系单价、经取代或未经取代、最多具有15个 碳原子之烷基、烷氧基、芳烃基或杂芳基 -具有化学通式(2)或(3)之唑 及其酯类、醚类或盐类, 其中X及Y系相同或不同且代表CR4或N,而且R4系-H、- COOH、-OH、-NH2、-NO2-、-SH、-SO3-、-F、-Cl、-Br、-I、 C1-C5-烷基羰基或R1,及R1所代表之意义与化学通式(1 )内者相同而且 其中R2及R3系相同或不同且系R4或其中化学通式(3) 中之C1及C2(并非取代基R2及R3)系藉助于[-CR5R6-]a桥 联接(其中a系1、2、3或4)而形成一环,其中R5及R6系 相同或不同且系R4及一个或更多个非相邻基[-CR5R6- ]可由氧、硫、或一亚胺基代换,该亚胺基可未经 取代或业经C1-C5-烷基取代,而且 两个相邻[-CR5R6-]基可由一[-CR5=CR6-]基或一[-CR5=N-] 基代换, -具有化学通式(4)或(5)之异酮: 及其酯类、醚类或盐类, 其中X,R1,R2,R3代表之意义与以上所界定者相同且化 学通式(5)中之C1及C2(并非取代基R2及R3)可藉助于化 学通式(3)中所界定之桥联接而形成一环。 5.如申请专利范围第1或2项之方法,其中本发明方 法所用之微生物菌株系选自由下列诸菌株所组成 之族群:具有经修饰cysE对偶基因之菌株;含有外流 基因之菌株;具有经修饰CysB活性之菌株;利用非特 定致突变方法结合半胱胺酸生产过賸或减低半胱 胺酸降解之筛选法所制造之菌株。 6.如申请专利范围第1或2项之方法,其中所用微生 物菌株系一大肠杆菌菌株。 7.如申请专利范围第1或6项之方法,其中该微生物 菌株在发酵器内之生长系呈连续培养基、分批培 养基或喂养分批培养基状。 8.如申请专利范围第1或2项之方法,其中于发酵过 程中连续添加一碳源及一亲核化合物。 9.如申请专利范围第1或2项之方法,其中该亲核化 合物系于发酵作用起始6至8小时之后开始添加且 持续至发酵作用终止。 10.如申请专利范围第1或2项之方法,其中亲核化合 物之添加量为每公升发酵培养基初始体积10至1000 毫莫耳。 11.如申请专利范围第1或2项之方法,其中所用碳源 系糖类、糖醇类或有机酸类。 12.如申请专利范围第11项之方法,其中所加碳源系 呈适当形式以确保发酵器内之葡萄糖含量系维持 在0.1至50公克/公升。 13.如申请专利范围第1或2项之方法,其中所用氮源 系氨、铵盐或蛋白质水解产物。 14.如申请专利范围第1或2项之方法,其中发酵培养 基之酸度为4至10及保温温度为15至45℃。 15.如申请专利范围第1或2项之方法,其中该方法系 在有(需)氧生长之情况下实施。 16.如申请专利范围第1或2项之方法,其中藉过滤或 离心作用将生物质自该发酵配合料内移开之后,该 非蛋白原L-胺基酸系藉助于萃取、吸附、离子交 换色谱层析、沉淀或结晶自培养基上清液内分离 出来。 17.如申请专利范围第1或2项之方法,其中该非蛋白 原L-胺基酸系一具有化学通式(6)且呈L构形之胺基 酸: 其中Z系一选自化学通式(7)至(13)之单价基 及其酯类、醚类或盐类, 及R1、R2、R3、R4、X及Y代表之意义与化学通式(1)至 (5)内所界定者相同。 18.一种选自一个族群之化合物,该族群包括1,2,3,4- 四唑-1-基-L-丙胺酸(14)及1,2,3,4-四唑-2-基-L-丙胺酸( 15)及其衍生物(包含其酯类、醚类或盐类)及1,2,3- 三唑-1-基-L-丙胺酸(16)及1,2,3-三唑-2-基-L-丙胺酸(17 )及其衍生物(包含其酯类、醚类及盐类), 其中R1、R2、R3及R4代表之意义与申请专利范围第4 项内所界定者相同。 19.化学通式之S-杂芳基-L-半光胺酸衍生物 其中R7具有下述意义:咯基、唑基、唑基、 唑基、喃基、啶基、基、苯骈咪唑基 、苯骈三唑基或嘌呤基。 |
